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1、 動物動物細(xì)胞融合與單克隆抗體細(xì)胞融合與單克隆抗體 兩個細(xì)胞正在融合兩個細(xì)胞正在融合 受精作用受精作用學(xué)習(xí)目標(biāo)一：動物細(xì)胞融合（細(xì)胞雜交）學(xué)習(xí)目標(biāo)一：動物細(xì)胞融合（細(xì)胞雜交）1、概念：、概念：2、結(jié)果：、結(jié)果：形成單核的雜交細(xì)胞形成單核的雜交細(xì)胞3、原理：、原理：細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性4、誘導(dǎo)方法、誘導(dǎo)方法物理法：離心、振動、電激物理法：離心、振動、電激化學(xué)法：聚乙二醇（化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)生物法：生物法：滅活的病毒（最常用）滅活的病毒（最常用）“2個或多個動物細(xì)胞個或多個動物細(xì)胞”“1”、“雜交單核細(xì)胞雜交單核細(xì)胞”思考：為什么細(xì)胞融合過程中使用的病毒思考：為什么細(xì)胞融合過程中使

2、用的病毒 需要滅活？不滅活行嗎？需要滅活？不滅活行嗎？因?yàn)闇缁畹牟《灸苁辜?xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分因?yàn)闇缁畹牟《灸苁辜?xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合，不滅活的話病毒會感染細(xì)胞，導(dǎo)發(fā)生融合，不滅活的話病毒會感染細(xì)胞，導(dǎo)致疾病。致疾病。滅活喪失感染性，但保留融合活性。滅活喪失感染性，但保留融合活性。用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合過程：用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合過程：細(xì)胞核細(xì)胞核滅活病毒顆粒滅活病毒顆粒細(xì)胞核細(xì)胞核雜交單核細(xì)胞雜交單核細(xì)胞5、過程：、過程：動物細(xì)胞動物細(xì)胞A動物細(xì)胞動物細(xì)胞B誘導(dǎo)，融合誘導(dǎo)，融合（膜、質(zhì)、核融合）（膜、質(zhì)、

3、核融合）1個完整的雜個完整的雜交細(xì)胞交細(xì)胞AB6、意義：、意義：成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段；和生物新品種培育等的重要手段；為為制造單克隆抗體開辟了新途徑。制造單克隆抗體開辟了新途徑。突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。雜交成為可能。7、應(yīng)用：、應(yīng)用：強(qiáng)調(diào)：強(qiáng)調(diào)：效應(yīng)效應(yīng)B淋巴細(xì)胞是能淋巴細(xì)胞是能夠產(chǎn)生抗體的夠產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，下文將其簡稱為下文將其簡稱為B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞抗體：能夠與抗原發(fā)生特異抗體：能夠與抗原發(fā)生特異 性結(jié)合的性結(jié)合的免疫球蛋白免疫球蛋白。效應(yīng)效應(yīng)B細(xì)胞細(xì)

4、胞(漿細(xì)胞）漿細(xì)胞）記憶記憶B細(xì)細(xì)胞胞學(xué)習(xí)目標(biāo)二：單克隆抗體學(xué)習(xí)目標(biāo)二：單克隆抗體B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞增殖分化增殖分化受抗原刺激受抗原刺激能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是漿漿細(xì)胞（即效應(yīng)細(xì)胞（即效應(yīng)B細(xì)胞）。細(xì)胞）?？贵w的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法:抗原抗原 反復(fù)注射動物反復(fù)注射動物從動物的從動物的血清血清中分離抗體中分離抗體該法制備抗體的缺點(diǎn)：該法制備抗體的缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低，且抗產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度體的特異性差、靈敏度低。低。單克隆抗體（雜交瘤技術(shù)）單克隆抗體（雜交瘤技術(shù)）讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念 人們發(fā)現(xiàn)，動物在

5、免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的人們發(fā)現(xiàn)，動物在免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的B細(xì)細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體，但是每胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體，但是每個個B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個要想獲得大量的單一抗體，必須用單個B細(xì)胞進(jìn)行無細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，即克隆。性繁殖，即克隆。單克隆單克隆抗體：抗體：單個單個B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì) 單一、特異性強(qiáng)的抗體。單一、特異性強(qiáng)的抗體。資料分析資料分析提示提示1：對：對B細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？提示提示2：我們所

6、學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？問題：問題：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請嘗試設(shè)計(jì)如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請嘗試設(shè)計(jì) 一個方案。一個方案。學(xué)習(xí)目標(biāo)二：單克隆抗體學(xué)習(xí)目標(biāo)二：單克隆抗體一個一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體 骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計(jì)方案：設(shè)計(jì)方案：動物細(xì)胞融合技動物細(xì)胞融合技術(shù)術(shù)單克隆單克隆抗體抗體 既能產(chǎn)生特異性抗體，既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖的細(xì)胞又能大量增殖的細(xì)胞1975年英國科學(xué)家年英國科學(xué)家米爾斯坦米爾斯坦和和柯勒柯勒的實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)BB、

7、B瘤瘤、瘤瘤瘤瘤（B、瘤）、瘤）（一選）（一選）選選擇性培養(yǎng)基擇性培養(yǎng)基：只有只有雜交瘤雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞才能存才能存活活獲得產(chǎn)生相應(yīng)獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的抗體的B細(xì)胞細(xì)胞（二選）：（二選）：選能產(chǎn)生所需選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜專一抗體的雜交瘤細(xì)胞交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：既能產(chǎn)生特異性既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量抗體，又能大量增殖。增殖。單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程 注射抗原注射抗原效應(yīng)效應(yīng)B淋淋巴細(xì)胞巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、細(xì)胞融合、篩選篩選雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)篩選篩選，繼續(xù)培養(yǎng)，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)

8、生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體思考：思考：此此過程利用的過程利用的原理和技術(shù)有哪些？原理和技術(shù)有哪些？免疫原理免疫原理細(xì)胞融合技術(shù)細(xì)胞融合技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)3、單克隆抗體的應(yīng)用：、單克隆抗體的應(yīng)用：單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備應(yīng)用于應(yīng)用于運(yùn)載藥物：制成運(yùn)載藥物：制成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療既不損傷正常細(xì)胞，又減少了用藥劑量。既不損傷正常細(xì)胞，又減少了用藥劑量。作為診斷試劑（最廣

9、泛的用途）作為診斷試劑（最廣泛的用途）：準(zhǔn)確識別各種抗原物質(zhì)，并特異性結(jié)合準(zhǔn)確識別各種抗原物質(zhì)，并特異性結(jié)合優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確、高效、簡易、快速準(zhǔn)確、高效、簡易、快速“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”單克隆抗體藥物單克隆抗體藥物 獲得雜種植株獲得雜種植株用途用途誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞膜的流動性、植物植物細(xì)胞全能性細(xì)胞全能性動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目原理原理比較植物體細(xì)胞雜交、動物細(xì)胞融合比較植物體細(xì)胞雜交、動物細(xì)胞融合獲得雜種細(xì)胞獲得雜種細(xì)胞、制備單克隆抗體制備單克隆抗體離心、電激、離心、電激、振動、振動、聚乙二醇聚乙二醇離心、電激、離心、電激、振動、振動、聚乙二醇聚乙二醇滅活病毒滅活病毒小結(jié)小結(jié):三個重點(diǎn)過程三個重點(diǎn)過程三個三個“一一”一個誘導(dǎo)一個誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的動物細(xì)胞融合的新方法新方法 滅活病毒滅活病毒一個新細(xì)胞一個新細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個優(yōu)勢一個優(yōu)勢 單克隆抗體特異性強(qiáng)、單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備的優(yōu)勢靈敏度高、可大量制備的優(yōu)勢動物細(xì)胞培養(yǎng)過程動物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程細(xì)胞核移植過程細(xì)胞核移植過程