《DNA瓊脂糖凝膠電泳制備全過(guò)程圖解課件.ppt》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《DNA瓊脂糖凝膠電泳制備全過(guò)程圖解課件.ppt（19頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)趨R文網(wǎng)上搜索。

1、DNADNA瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳1 1a a實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理n n瓊脂糖為鏈狀多糖瓊脂糖為鏈狀多糖瓊脂糖為鏈狀多糖瓊脂糖為鏈狀多糖 繩狀瓊脂糖束繩狀瓊脂糖束繩狀瓊脂糖束繩狀瓊脂糖束大網(wǎng)孔型大網(wǎng)孔型大網(wǎng)孔型大網(wǎng)孔型 凝膠凝膠凝膠凝膠 分離、鑒定、純化分離、鑒定、純化分離、鑒定、純化分離、鑒定、純化DNADNAn n影響影響影響影響DNADNA遷移率的因素：遷移率的因素：遷移率的因素：遷移率的因素：DNADNA分子的大小、構(gòu)分子的大小、構(gòu)分子的大小、構(gòu)分子的大小、構(gòu) 象，凝膠濃度，電壓，電泳緩沖液的組成象，凝膠濃度，電壓，電泳緩沖液的組成象，凝膠濃度，電壓，電泳緩沖液的組成象，凝膠濃度，電

2、壓，電泳緩沖液的組成n n緩沖液緩沖液緩沖液緩沖液pHpHDNA PiDNA Pi，DNADNA帶負(fù)電荷，遷移率帶負(fù)電荷，遷移率帶負(fù)電荷，遷移率帶負(fù)電荷，遷移率與與與與 分子量對(duì)數(shù)成反比分子量對(duì)數(shù)成反比分子量對(duì)數(shù)成反比分子量對(duì)數(shù)成反比n nDNADNA分子構(gòu)象影響遷移率：共價(jià)閉環(huán)分子構(gòu)象影響遷移率：共價(jià)閉環(huán)分子構(gòu)象影響遷移率：共價(jià)閉環(huán)分子構(gòu)象影響遷移率：共價(jià)閉環(huán)DNADNA線線線線 狀狀狀狀DNADNA開(kāi)環(huán)開(kāi)環(huán)開(kāi)環(huán)開(kāi)環(huán)DNADNA2 2a a不同濃度瓊脂糖分離不同濃度瓊脂糖分離DNA分子的范圍分子的范圍瓊脂糖濃度（瓊脂糖濃度（瓊脂糖濃度（瓊脂糖濃度（%）分離范圍（分離范圍（分離范圍（分離范圍（

3、kbkb）0.3 5-60 0.3 5-60 0.6 1-20 0.6 1-20 0.7 0.8-10 0.7 0.8-10 0.9 0.5-7 0.9 0.5-7 1.2 0.4-6 1.2 0.4-6 1.5 0.2-4 1.5 0.2-4 2.0 0.1-3 2.0 0.1-33 3a a瓊脂糖凝膠中瓊脂糖凝膠中DNA的觀察的觀察溴化乙錠（溴化乙錠（溴化乙錠（溴化乙錠（EBEB）DNADNA：紫外光下：紫外光下：紫外光下：紫外光下 紅色熒光紅色熒光紅色熒光紅色熒光4 4a a主要實(shí)驗(yàn)器材主要實(shí)驗(yàn)器材電泳儀電泳儀電泳槽電泳槽緩沖液緩沖液瓊脂糖瓊脂糖凝膠槽凝膠槽梳子梳子取液器取液器溴酚藍(lán)溴酚

4、藍(lán)5 5a a電泳槽結(jié)構(gòu)電泳槽結(jié)構(gòu)6 6a a操作步驟操作步驟n n瓊脂糖凝膠的制備：溶化，冷卻，瓊脂糖凝膠的制備：溶化，冷卻，瓊脂糖凝膠的制備：溶化，冷卻，瓊脂糖凝膠的制備：溶化，冷卻，EBEBn n凝膠板的制備：加梳子，倒膠凝膠板的制備：加梳子，倒膠凝膠板的制備：加梳子，倒膠凝膠板的制備：加梳子，倒膠n n樣品的制備：樣品樣品的制備：樣品樣品的制備：樣品樣品的制備：樣品+1/5+1/5體積溴酚藍(lán)體積溴酚藍(lán)體積溴酚藍(lán)體積溴酚藍(lán)n n加樣：加樣端為負(fù)極（黑）加樣：加樣端為負(fù)極（黑）加樣：加樣端為負(fù)極（黑）加樣：加樣端為負(fù)極（黑）n n電泳：電泳：電泳：電泳：5V/cm5V/cmn n觀察：紫外

5、燈下觀察，照相觀察：紫外燈下觀察，照相觀察：紫外燈下觀察，照相觀察：紫外燈下觀察，照相7 7a a溶溶 膠膠8 8a a準(zhǔn)備膠槽準(zhǔn)備膠槽9 9a a凝膠冷卻至凝膠冷卻至凝膠冷卻至凝膠冷卻至50C50C，加，加，加，加EBEB至終濃度至終濃度至終濃度至終濃度0.5g/ml0.5g/ml1010a a鋪鋪 膠膠1111a a凝膠凝固后取出梳子凝膠凝固后取出梳子1212a a加緩沖液加緩沖液1313a a準(zhǔn)備樣品準(zhǔn)備樣品1414a a點(diǎn)點(diǎn) 樣樣1515a a電電 泳泳1616a a注意觀察溴酚藍(lán)染液的遷移注意觀察溴酚藍(lán)染液的遷移1717a a紫外燈下觀察電泳結(jié)果紫外燈下觀察電泳結(jié)果1818a a照照 相相1919a a