《分析化學(xué)：第十一章 氣相色譜分析法（含液相）（3）.pdf》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《分析化學(xué)：第十一章 氣相色譜分析法（含液相）（3）.pdf（36頁珍藏版）》請在匯文網(wǎng)上搜索。

1、School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院高效液相色譜法第一節(jié)概述第一節(jié)概述高效液相色譜法：高效液相色譜法：以氣相色譜為基礎(chǔ)，在經(jīng)典液相色譜實驗和技術(shù)基礎(chǔ)上建立的一種液相色譜法一、HPLC與經(jīng)典LC區(qū)別二、HPLC與GC差別三、高效液相色譜儀流程圖四、特點School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院一、HPLC與經(jīng)典LC區(qū)別主要區(qū)別：固定相差別，輸液設(shè)備和檢測手段1經(jīng)典LC：僅做為一種分離手段柱內(nèi)徑13cm，固定相粒徑100m 且不均勻常壓輸送流動相柱效

2、低（H，n）分析周期長無法在線檢測2HPLC：分離和分析柱內(nèi)徑26mm，固定相粒徑RtnHuuHscmu，但柱效，時，/1min/1mlu=選擇兼顧柱效和分析時間，2)2)討論：討論：1）流動相流速對HPLC板高的影響（與GC對比）dpA=2dpA柱效，nHAdpSchool of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院3）傳質(zhì)阻抗項及其影響）（忽略固定相傳質(zhì)阻抗smmssmmCCCCCC+=忽略固定相傳質(zhì)阻抗態(tài)流動相的傳質(zhì)阻

3、抗注：只考慮流動相和靜uCuCAHHPLCsmm+=：msmmDdpCC2=mDdpC2TDm柱效，nHCdp柱效，nHDm，柱阻，但易產(chǎn)生氣泡mmDTCDTSchool of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院三、三、HPLC法中分離條件的選擇法中分離條件的選擇1.固定相與裝柱方法的選擇：選粒徑小的、分布均勻的球形固定相（dp10m）首選化學(xué)鍵合相，勻漿法裝柱2.流動相及其流速的選擇：選粘度小、低流速的流動相甲醇，1ml

4、/min3.柱溫的選擇：選室溫250C左右School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院第三節(jié)各類高效液相色譜法第三節(jié)各類高效液相色譜法一、液固吸附色譜法（LSC）二、液液分配色譜法（LLC）三、化學(xué)鍵合相色譜法（BPC）School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院一、液固吸附色譜法（一、液固吸附色譜法（LSC）流動相為液體，固定相為固體吸附劑流動相為液體，固定相為固體吸附劑1分離機制分離機制：利用溶質(zhì)分子占據(jù)固定相表面吸附活性中心能力的差異分離前提：K不等

5、或k不等)1(0mRVSKtt+=mVSKk=School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院2固定相：固定相：與LC比，固定相粒徑不同（17%分配色譜 硅膠失活載體吸附的水固定液School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院二、液液分配色譜法（二、液液分配色譜法（LLC）1分離機制：利用組分在兩相中溶解度的差異2固定相：載體+固定液（物理或機械涂漬法）?缺點：系統(tǒng)內(nèi)部壓力大，易流失，不實用固定液極性NLLC固定液非極性RLLC3正相色譜固定液極性 流動相極性（

6、NLLC）?極性小的組分先出柱，極性大的組分后出柱?適于分離極性組分反相色譜固定液極性 固定相極性底劑+有機調(diào)節(jié)劑（極性調(diào)節(jié)劑）?例：水+甲醇，乙腈，THFSchool of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院4流動相極性與k的關(guān)系：流動相極性，洗脫能力，k，組分tR5出柱順序：極性大的組分先出柱極性小的組分后出柱6適用：非極性中等極性組分（HPLC80%問題）School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院（三）正相鍵合相色譜（三）正相鍵合相色譜1分離機制：溶質(zhì)分子與

7、固定相之間定向作用力、誘導(dǎo)力、或氫鍵作用力2固定相：極性大的氰基或氨基鍵合相3流動相：極性?。ㄍ琇SC）底劑+有機極性調(diào)節(jié)劑?例：正己烷+氯仿-甲醇，氯仿-乙醇School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院4流動相極性與k的關(guān)系：流動相極性，洗脫能力，組分tR，k5出柱順序：結(jié)構(gòu)相近組分，極性小的組分先出柱極性大的組分后出柱6適用：氰基鍵合相與硅膠的柱選擇性相似（極性稍?。┓蛛x物質(zhì)也相似 氨基鍵合相與硅膠性質(zhì)差別大，堿性分析極性大物質(zhì)、糖類等School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化

8、工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院（四）離子對色譜和離子抑制色譜（四）離子對色譜和離子抑制色譜1反相離子對色譜法2反相離子抑制色譜School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院1反相離子對色譜法（反相離子對色譜法（IPC或或PIC）反相色譜中，在極性流動相中加入離子對試劑，使被測組分與其中的反離子形成中性離子對，增加k和tR，以改善分離1）離子對試劑：烷基磺酸鈉分析堿四丁基季胺鹽分析酸2）影響k的因素a與m的極性有關(guān)（同反相色譜）b與R的鏈長有關(guān)：R長，極性小，tR，k3）適用：較強的有機酸、堿School of Chemical

9、Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院2反相離子抑制色譜反相離子抑制色譜在反相色譜中，通過加入緩沖溶液調(diào)節(jié)流動相pH值，抑制組分解離，增加其k和tR，以達到改善分離的目的1）離子抑制劑：弱酸、弱堿性物質(zhì)pH一定的緩沖溶液2）k的影響因素：與流動相極性有關(guān)，還與pH值有關(guān)?選擇流動相：應(yīng)同時考慮極性及pH值酸性物質(zhì)加入酸HAc tR，k堿性物質(zhì)加入堿NH3H2O tR，k?調(diào)節(jié)pH范圍：3.08.0pH8.0 破壞鍵合相與載體的結(jié)合pH3.0 腐蝕柱子3）適用：極弱酸堿物質(zhì)pH=37弱酸；pH=78弱堿；兩性化合物School of Chemical Eng

10、ineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院第四節(jié)影響分離的因素第四節(jié)影響分離的因素122114kknR+=uCAH+=流動相采用粘度小、低流速的勻的固定相：采用粒度小、填充均n12121212RRRRVVttkkKK=溫影響小）質(zhì)和固定相性質(zhì)（受柱：調(diào)整流動相種類、性0ttVVKVCVCWWkRmsmmssms=?。┑呐浔龋ㄊ苤鶞赜绊戄^：調(diào)整流動相和固定相kSchool of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院2對流動相的要求：1）與固定液不反應(yīng)2）對樣品有良好溶解度k=110k=25 最理想的3）與檢測器

11、匹配：UV（常用，測定波長應(yīng)大于溶劑的截止波長）熒光，電化學(xué)4）使用粘度小、純度高的流動相（甲醇，乙腈）使用前過濾、脫氣School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院3洗脫方式1）等度洗脫（恒組成溶劑洗脫）以固定配比的溶劑系統(tǒng)洗脫組分（一個泵）類似GC的等溫度洗脫2）梯度洗脫：在一定分析周期內(nèi)不斷變換流動相的種類和比例即不斷改變其極性（兩個泵）適于分析極性差別較大的復(fù)雜組分類似GC的程序升溫（沸程較長樣品）School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院Than

12、ks for your attention,and good luck in your further study!School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院第五節(jié) 高效液相色譜儀第五節(jié) 高效液相色譜儀1泵：恒壓泵：流量精度不穩(wěn)恒流泵：常用2進樣裝置1）隔膜進樣（高分子有機硅膠墊進樣室）GC系統(tǒng)壓力較小，可以HPLC系統(tǒng)壓力太大，必須停泵進樣（早期）2）閥進樣：不必停泵，六通閥School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院3色譜柱：直徑46mm,柱長1030cm柱效評價：色譜系統(tǒng)適應(yīng)性試驗R，n，fs（拖尾因子）柱再生：維護、保養(yǎng)、柱子的沖洗4檢測器1）紫外檢測器：適于吸收紫外光的物質(zhì)2）熒光檢測器：只能分析自身發(fā)光的物質(zhì)靈敏度高3）示差折光檢測器：利用折光率的差別靈敏度低，溫度要求嚴(yán)格4）電化學(xué)檢測器5）化學(xué)發(fā)光School of Chemical Engineering,HFUT合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院作業(yè)合肥工業(yè)大學(xué) 化工學(xué)院作業(yè)p345 習(xí)題習(xí)題 1，2，5，7