高考生物大一輪復(fù)習(xí)-蛋白質(zhì)和DNA技術(shù)ppt-中圖版選修1課件.ppt
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1、第六章蛋白質(zhì)和DNA技術(shù)【考考綱綱考情考情】最新考最新考綱綱及要求及要求三年考情三年考情(以山以山東東高考卷高考卷為為例例)20142014年年20132013年年20122012年年蛋白蛋白質(zhì)質(zhì)的提取和分離的提取和分離無無無無無無PCRPCR技技術(shù)術(shù)的基本操作和的基本操作和應(yīng)應(yīng)用用T35T35非非選擇題選擇題無無無無【知識梳理知識梳理】考點一考點一 血清蛋白的提取和分離血清蛋白的提取和分離1.1.方法及原理:方法及原理:(1)(1)方法:電泳法。方法:電泳法。(2)(2)原理:原理:各種蛋白質(zhì)分子帶電性質(zhì)的差異;各種蛋白質(zhì)分子帶電性質(zhì)的差異;分子本身大小、形狀的不同。分子本身大小、形狀的不同
2、。2.2.實驗實驗操作程序:操作程序:(1)(1)點點樣樣:用微量加:用微量加樣樣器取新制血清,小心加到器取新制血清,小心加到電電泳泳樣樣品槽的膠面上。品槽的膠面上。(2)(2)電電泳:打開并泳:打開并調(diào)節(jié)穩(wěn)壓穩(wěn)調(diào)節(jié)穩(wěn)壓穩(wěn)流流電電泳泳儀進儀進行行電電泳。泳。(3)(3)染色:用染色:用質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)量分?jǐn)?shù)為為0.05%0.05%的考的考馬馬斯亮斯亮藍(lán)藍(lán)R R250250染色液染色液對對凝膠凝膠進進行染行染色。色。(4)(4)脫色:用體脫色:用體積積分?jǐn)?shù)分?jǐn)?shù)為為7%7%的醋酸溶液脫色。的醋酸溶液脫色。(5)(5)制干膠板:保存液浸泡凝膠板后,放在兩制干膠板:保存液浸泡凝膠板后,放在兩層層透氣玻璃透氣
3、玻璃紙紙中中間間自然自然干燥。干燥?!靖呖季靖呖季尽?1)(1)電泳時,帶電的顆粒向與其電性相反的電極方向移動。電泳時,帶電的顆粒向與其電性相反的電極方向移動。(2)(2)電泳時,蛋白質(zhì)所帶的電荷數(shù)越多,移動得越快;電荷數(shù)相同電泳時,蛋白質(zhì)所帶的電荷數(shù)越多,移動得越快;電荷數(shù)相同時,分子量越小,則移動越快。時,分子量越小,則移動越快。考點二考點二 DNADNA片段的擴增片段的擴增1.1.細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞內(nèi)DNADNA復(fù)制與復(fù)制與PCRPCR技術(shù)的比較:技術(shù)的比較:項項目目DNADNA復(fù)制復(fù)制PCRPCR擴擴增增不不同同點點場場所所細(xì)細(xì)胞內(nèi)胞內(nèi)細(xì)細(xì)胞外胞外能量能量ATPATP提供能量提供能量不需不
4、需ATPATP提供能量提供能量酶酶解旋解旋酶酶、DNADNA聚合聚合酶酶耐高溫的耐高溫的TaqDNATaqDNA聚合聚合酶酶是否有是否有轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄伴有伴有轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄,產(chǎn)產(chǎn)生引物生引物無無轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄,需加入兩種引物,需加入兩種引物特點特點邊邊解旋解旋邊邊復(fù)制,半保留復(fù)制復(fù)制,半保留復(fù)制體外迅速體外迅速擴擴增增循循環(huán)環(huán)次數(shù)次數(shù)受生物體自身控制受生物體自身控制3030多次多次緩緩沖液沖液不需要不需要需要人需要人為為控制控制設(shè)備設(shè)備無無嚴(yán)嚴(yán)格控制溫度格控制溫度變變化的溫控化的溫控設(shè)備設(shè)備項項目目DNADNA復(fù)制復(fù)制PCRPCR擴擴增增相相同同點點原料原料四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸復(fù)制原理復(fù)制原理嚴(yán)嚴(yán)格遵循
5、堿基互格遵循堿基互補補配配對對原原則則模板模板DNADNA為為模板模板引物引物都需要與模板相都需要與模板相結(jié)結(jié)合的引物合的引物2.PCR2.PCR技術(shù)反應(yīng)過程中控制不同溫度的意義:技術(shù)反應(yīng)過程中控制不同溫度的意義:(1)95(1)95變性,雙鏈變性,雙鏈DNADNA解旋為單鏈。解旋為單鏈。(2)55(2)55復(fù)性,引物與兩條單鏈復(fù)性,引物與兩條單鏈DNADNA結(jié)合。結(jié)合。(3)72(3)72延伸,耐高溫的延伸,耐高溫的DNADNA聚合酶有最大活性,使聚合酶有最大活性,使DNADNA新鏈由新鏈由55端向端向33端延伸。端延伸?!靖呖季靖呖季尽縋CRPCR技技術(shù)術(shù)的一個循的一個循環(huán)環(huán)包括高溫包
6、括高溫變變性、低溫復(fù)性和中溫延伸三個步性、低溫復(fù)性和中溫延伸三個步驟驟;每一循每一循環(huán)環(huán)中中DNADNA聚合聚合酶酶只能特異地復(fù)制只能特異地復(fù)制處處于兩個引物之于兩個引物之間間的的DNADNA序列,序列,使使這這段固定段固定長長度的序列呈指數(shù)增度的序列呈指數(shù)增長長。類類型一型一 蛋白蛋白質(zhì)質(zhì)的提取和分離的提取和分離【典例典例1 1】(2015(2015濟濟南模南模擬擬)血血紅紅蛋白是人和其他脊椎蛋白是人和其他脊椎動動物物紅細(xì)紅細(xì)胞的主胞的主要要組組成成分,成成分,負(fù)責(zé)負(fù)責(zé)血液中血液中O O2 2和部分和部分COCO2 2的運的運輸輸。請請根據(jù)血根據(jù)血紅紅蛋白的提取蛋白的提取和分離回答和分離回答
7、問題問題:(1)(1)凝膠色凝膠色譜譜法的基本原理是根據(jù)法的基本原理是根據(jù)_分離蛋白分離蛋白質(zhì)質(zhì)的有效方法。的有效方法。(2)(2)洗滌紅細(xì)胞的目的是去除洗滌紅細(xì)胞的目的是去除_,洗滌次數(shù)過少,無法除去,洗滌次數(shù)過少,無法除去_;離心速度過高和時間過長會使;離心速度過高和時間過長會使_等一同沉等一同沉淀,達不到分離的效果。洗滌干凈的標(biāo)志是淀,達不到分離的效果。洗滌干凈的標(biāo)志是_。釋放血紅蛋白的過程中起作用的是。釋放血紅蛋白的過程中起作用的是_。(3)(3)洗脫的液體應(yīng)盡量與浸泡凝膠所用的液體洗脫的液體應(yīng)盡量與浸泡凝膠所用的液體_(_(填填“相同相同”或或“不同不同”),洗脫時,對洗脫液的流速要
8、求是,洗脫時,對洗脫液的流速要求是_。(4)(4)在洗脫在洗脫過過程中加入物程中加入物質(zhì)質(zhì)的量的量濃濃度度為為20 20 mmolmmol/L/L的磷酸的磷酸緩緩沖液沖液(pH(pH為為7.0)7.0)的目的是的目的是_,如果,如果紅紅色區(qū)色區(qū)帶帶_,說說明色明色譜譜柱制作成功。柱制作成功?!窘忸}指南解題指南】(1)(1)關(guān)鍵詞:關(guān)鍵詞:“洗滌紅細(xì)胞洗滌紅細(xì)胞”“”“離心速度離心速度”“”“釋放血紅釋放血紅蛋白蛋白”。(2)(2)隱含信息:紅色區(qū)帶為血紅蛋白。隱含信息:紅色區(qū)帶為血紅蛋白?!窘馕鼋馕觥?1)(1)凝膠色譜法是根據(jù)蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量大小分離蛋白凝膠色譜法是根據(jù)蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)
9、量大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。質(zhì)的有效方法。(2)(2)洗滌紅細(xì)胞的目的是去除血漿蛋白等雜蛋白,如果洗滌次數(shù)過少,洗滌紅細(xì)胞的目的是去除血漿蛋白等雜蛋白,如果洗滌次數(shù)過少,無法除去血漿蛋白;離心速度過高和時間過長會使白細(xì)胞等一同沉淀,無法除去血漿蛋白;離心速度過高和時間過長會使白細(xì)胞等一同沉淀,達不到分離的效果。洗滌干凈的標(biāo)志是離心后的上清液中沒有黃色。達不到分離的效果。洗滌干凈的標(biāo)志是離心后的上清液中沒有黃色。釋放血紅蛋白的過程中起作用的是蒸餾水和甲苯,其中蒸餾水的作用釋放血紅蛋白的過程中起作用的是蒸餾水和甲苯,其中蒸餾水的作用是使紅細(xì)胞吸水破裂,甲苯可溶解細(xì)胞膜,加入甲苯能加速紅細(xì)胞破是使紅
10、細(xì)胞吸水破裂,甲苯可溶解細(xì)胞膜,加入甲苯能加速紅細(xì)胞破裂并釋放血紅蛋白。裂并釋放血紅蛋白。(3)(3)洗脫的液體應(yīng)盡量與浸泡凝膠所用的液體相同,否則會影響洗脫洗脫的液體應(yīng)盡量與浸泡凝膠所用的液體相同,否則會影響洗脫液的液的pHpH,使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)受到破壞。洗脫時,洗脫液的流速要保持穩(wěn),使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)受到破壞。洗脫時,洗脫液的流速要保持穩(wěn)定,否則將影響蛋白質(zhì)的分離效果。定,否則將影響蛋白質(zhì)的分離效果。(4)(4)在洗脫過程中加入物質(zhì)的量濃度為在洗脫過程中加入物質(zhì)的量濃度為20 20 mmolmmol/L/L的磷酸緩沖液的磷酸緩沖液(pH(pH為為7.0)7.0)的目的是準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境
11、,保持體外的的目的是準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境,保持體外的pHpH和體內(nèi)的和體內(nèi)的一致,進而保持蛋白質(zhì)的正常形態(tài)結(jié)構(gòu);洗脫時,血紅蛋白的顏色可一致,進而保持蛋白質(zhì)的正常形態(tài)結(jié)構(gòu);洗脫時,血紅蛋白的顏色可以指示血紅蛋白的位置,因此當(dāng)紅色區(qū)帶均勻一致地移動時,說明色以指示血紅蛋白的位置,因此當(dāng)紅色區(qū)帶均勻一致地移動時,說明色譜柱制作成功。譜柱制作成功。答案:答案:(1)(1)相對分子質(zhì)量的大小相對分子質(zhì)量的大小(2)(2)雜蛋白雜蛋白(血漿蛋白血漿蛋白)血漿蛋白白細(xì)胞離心后的上清液中沒有血漿蛋白白細(xì)胞離心后的上清液中沒有黃色蒸餾水和甲苯黃色蒸餾水和甲苯(3)(3)相同保持穩(wěn)定相同保持穩(wěn)定(4)(4
12、)準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境,保持體外的準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境,保持體外的pHpH和體內(nèi)的一致均和體內(nèi)的一致均勻一致地移動勻一致地移動【延伸探究延伸探究】在血在血紅紅蛋白的提取蛋白的提取過過程中,哪些程中,哪些過過程能影響血程能影響血紅紅蛋白提蛋白提取的取的純純度?度?提示:提示:細(xì)胞的洗滌次數(shù):次數(shù)少,不能除去血漿蛋白。細(xì)胞的洗滌次數(shù):次數(shù)少,不能除去血漿蛋白。離心速度和時間:離心速度過高和時間過長,會使白細(xì)胞等一同沉離心速度和時間:離心速度過高和時間過長,會使白細(xì)胞等一同沉淀,得不到純凈的紅細(xì)胞。淀,得不到純凈的紅細(xì)胞。透析:透析不徹底,會含有小分子雜質(zhì)。透析:透析不徹底,會含有小分子
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