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1、第四章第四章 藥物定量分析與分析方法驗證藥物定量分析與分析方法驗證 第二節(jié)第二節(jié) 分析樣品的前處理方法分析樣品的前處理方法 第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法定量分析方法第三節(jié)第三節(jié) 藥品分析方法驗證藥品分析方法驗證練習(xí)與思考練習(xí)與思考基本要求基本要求 一、掌握定量分析方法及驗證的效能指標(biāo)。一、掌握定量分析方法及驗證的效能指標(biāo)。二、熟悉定量分析方法的特點二、熟悉定量分析方法的特點 三、熟悉樣品的前處理方法。三、熟悉樣品的前處理方法。四、了解定量分析樣品的前處理方法的進(jìn)展四、了解定量分析樣品的前處理方法的進(jìn)展 及在藥物分析中的應(yīng)用。及在藥物分析中的應(yīng)用。n重量分析法重量分析法n容量分析法容量分析法n光譜

2、分析法光譜分析法n色譜分析法色譜分析法第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法定量分析方法一、重量分析法一、重量分析法生成的沉淀而進(jìn)行分析的方法生成的沉淀而進(jìn)行分析的方法生成沉淀生成沉淀濾過濾過洗滌洗滌灼燒灼燒恒重。恒重。特點：特點：1 1、操作繁瑣、操作繁瑣2 2、結(jié)果準(zhǔn)確、結(jié)果準(zhǔn)確很少用很少用 （一）容量分析法的（一）容量分析法的特點特點 操作簡單、快速；操作簡單、快速；比較準(zhǔn)確（相對誤差比較準(zhǔn)確（相對誤差0.2%0.2%）；）；儀器普通易得儀器普通易得 常用于測定高含量或中含量組分，原料藥含量測定首選常用于測定高含量或中含量組分，原料藥含量測定首選二、容量分析法二、容量分析法 （二）容量分析法的（二）

3、容量分析法的計算計算問題問題 1.1.滴定度滴定度（T T）：）：每每1 1mlml規(guī)定濃度的滴定液相當(dāng)于被測物質(zhì)的質(zhì)量規(guī)定濃度的滴定液相當(dāng)于被測物質(zhì)的質(zhì)量(mg)mg)2.2.滴定度的計算滴定度的計算 aAaA（待測物）（待測物）+bB bB（滴定液）（滴定液）cC cC+dD dD a ba b T/MT/M 1 1m m T=ma/bMm：滴定液濃度：滴定液濃度(mol/L)M：被測物分子量：被測物分子量WA=TVB 3.百分含量的計算百分含量的計算 （1）直接滴定法）直接滴定法W W：供試品取樣量供試品取樣量 設(shè)至終點時，消耗滴定液體積為設(shè)至終點時，消耗滴定液體積為V ml則藥物實測質(zhì)

4、量為則藥物實測質(zhì)量為VT濃度校正因數(shù)濃度校正因數(shù) （2 2）間接滴定法）間接滴定法 1 1）生成物滴定法（略）生成物滴定法（略）藥物藥物 +A B 滴定滴定2 2）剩余滴定法（回滴法）剩余滴定法（回滴法）藥物藥物 +A（定、過量）（定、過量）剩余的剩余的 A+B （回滴）（回滴）V 空白試驗空白試驗V0滴定劑滴定劑 （3）以相當(dāng)于標(biāo)示量）以相當(dāng)于標(biāo)示量%表示表示n光譜光譜n光譜分析法光譜分析法n分光光度法分光光度法n分類分類 紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法 紅外分光光度法紅外分光光度法 原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法 熒光分光光度法熒光分光光度法 三、光譜分析法三、光譜分析法 三

5、、光譜分析法三、光譜分析法 （一）紫外（一）紫外-可見分光光度法可見分光光度法 吸收光譜范圍：紫外：吸收光譜范圍：紫外：200200400nm400nm 可見：可見：400400760nm760nm 靈敏度高，可達(dá)靈敏度高，可達(dá)10-4g/ml 10-7g/ml 1.特點特點 準(zhǔn)確度高，準(zhǔn)確度高，RE（%）為為2%5%5%儀器價格低廉，操作簡單，易普及，應(yīng)用廣泛儀器價格低廉，操作簡單，易普及，應(yīng)用廣泛 2.2.朗伯朗伯-比耳定律比耳定律 A=ECLA=ECL 吸收系數(shù)：摩爾吸收系數(shù)吸收系數(shù)：摩爾吸收系數(shù) 研究分子結(jié)構(gòu)研究分子結(jié)構(gòu) 百分吸收系數(shù)百分吸收系數(shù) 含量測定含量測定 3.3.測定方法測定

6、方法 要求供試品溶液的要求供試品溶液的A A應(yīng)在應(yīng)在0.3 0.3 0.70.7 1 1）對照品比較法：）對照品比較法：A A供供A A對對C C供供C C對對制劑：制劑：原料藥：原料藥：A AX XA AR RW WX XW WR R2）吸收系數(shù)法：）吸收系數(shù)法：注意：注意：應(yīng)應(yīng)100 應(yīng)注意儀器的校正和檢定：應(yīng)注意儀器的校正和檢定：作為計算濃作為計算濃度的因數(shù)進(jìn)行定量的方法，不是任何情況下都度的因數(shù)進(jìn)行定量的方法，不是任何情況下都適用的，特別是單色光不純的情況下，適用的，特別是單色光不純的情況下，A會隨會隨儀器不同而變化，誤差較大。儀器不同而變化，誤差較大。但若認(rèn)定一臺儀器，固定其工作狀態(tài)

7、和測但若認(rèn)定一臺儀器，固定其工作狀態(tài)和測定條件，則定條件，則C和和A間的關(guān)系在多數(shù)情況下仍符合間的關(guān)系在多數(shù)情況下仍符合LambertBeer定律。定律。3）計算分光光度法：）計算分光光度法：多種，具體按每種藥物規(guī)定的方法進(jìn)行多種，具體按每種藥物規(guī)定的方法進(jìn)行 如：如：VA的三點校正法的三點校正法4）比色法）比色法 加入顯色劑后，按照對照品比較法測定加入顯色劑后，按照對照品比較法測定 影響顯色因素很多，故需注意平行操作影響顯色因素很多，故需注意平行操作 空白溶劑：溶劑空白溶劑：溶劑+顯色劑，同法處理顯色劑，同法處理 （二）熒光分析法（二）熒光分析法 靈敏度高靈敏度高，可達(dá)，可達(dá)10-10g/m

8、l 10-12g/ml 在在低濃度低濃度進(jìn)行測定，防止自熄滅作用進(jìn)行測定，防止自熄滅作用 1.特點特點 用用基準(zhǔn)溶液基準(zhǔn)溶液校正校正儀器靈敏度儀器靈敏度 制備熒光制備熒光衍生物衍生物，可提高靈敏度和選擇性，可提高靈敏度和選擇性 干擾因素多干擾因素多，需做需做空白實驗空白實驗 樣品用樣品用量少量少，操作，操作簡單簡單，應(yīng)用，應(yīng)用范圍范圍較較廣廣 2.含量測定含量測定 原理：當(dāng)激發(fā)光強度、波長、所用溶劑及溫度原理：當(dāng)激發(fā)光強度、波長、所用溶劑及溫度等條件固定時，物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi)，其熒等條件固定時，物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi)，其熒光強度光強度R與與該物質(zhì)濃度該物質(zhì)濃度C成正比成正比 方法：對照品比較法

9、方法：對照品比較法 計算：計算：根據(jù)混合物中各組分的根據(jù)混合物中各組分的色譜行為差異色譜行為差異，先，先行分離后再在線或離線對各組分逐一進(jìn)行分析行分離后再在線或離線對各組分逐一進(jìn)行分析的方法，的方法，是分離分析混合物的最有力手段是分離分析混合物的最有力手段。按分離原理：吸附；分配；離子交換；排阻色譜按分離原理：吸附；分配；離子交換；排阻色譜分類分類 按分離方法：按分離方法：PC；TLC；柱色譜；柱色譜；GC；HPLC 特點：高靈敏度、特點：高靈敏度、高效能、高速度、應(yīng)用廣泛高效能、高速度、應(yīng)用廣泛四、色譜分析法四、色譜分析法 1.對儀器一般要求對儀器一般要求 固定相種類、流動相組分、檢測器類型

10、不得任意改變固定相種類、流動相組分、檢測器類型不得任意改變 其他均可適當(dāng)改變其他均可適當(dāng)改變 色譜圖色譜圖20分鐘分鐘內(nèi)記錄完畢內(nèi)記錄完畢 2.系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱的色譜柱的理論板數(shù)理論板數(shù)：n=5.54(tR/Wh/2)2 分離度分離度：R=2（tR1 tR2)/(W1+W2);應(yīng)大于應(yīng)大于1.5 重復(fù)性：重復(fù)性：對照液連續(xù)進(jìn)樣對照液連續(xù)進(jìn)樣5次，峰面積次，峰面積RSD2.0 拖尾因子拖尾因子：T=W0.05h/2d1 應(yīng)在應(yīng)在0.9 1.05 （一）（一）HPLC法法流動相流動相真空脫氣機真空脫氣機四元泵四元泵自動進(jìn)樣器自動進(jìn)樣器紫外檢測器紫外檢測器熒光檢測器熒光檢測器蒸發(fā)

11、光散射檢測器蒸發(fā)光散射檢測器液質(zhì)聯(lián)用儀液質(zhì)聯(lián)用儀質(zhì)譜檢測器質(zhì)譜檢測器流動相：對于以流動相：對于以C18為固定相的為固定相的反相色譜系統(tǒng)反相色譜系統(tǒng)，常用甲醇常用甲醇-水水，間或加以乙腈、緩沖液等為流動，間或加以乙腈、緩沖液等為流動相，有機溶劑比例通常不低于相，有機溶劑比例通常不低于5四元泵四元泵自動進(jìn)樣器自動進(jìn)樣器色譜柱色譜柱填充劑常用：十八烷基硅烷鍵合硅膠填充劑常用：十八烷基硅烷鍵合硅膠檢測器檢測器3.測定方法測定方法 1)內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中主成分含量內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中主成分含量對照液（對照液（R）：）：AR CR 峰面積峰面積 含量含量內(nèi)標(biāo)液（內(nèi)標(biāo)液（S）：）：AS C

12、S供試液（供試液（X）：）：AX CXf=AS/CSAR/CRf=AS/CSAx/CxCx=f AxAS/CS例例2)外標(biāo)法測定供試品中主成分含量外標(biāo)法測定供試品中主成分含量對照液（對照液（R）：）：AR CR 供試液（供試液（X）：）：AX CXCX CRAX ARCXCR AXAR要求：進(jìn)樣量準(zhǔn)確、操作條件穩(wěn)定要求：進(jìn)樣量準(zhǔn)確、操作條件穩(wěn)定 （二）（二）GC法法 1.對對GC儀器一般要求儀器一般要求 載載 氣：氣：氮氣氮氣 色譜柱：色譜柱：填充柱或毛細(xì)管柱填充柱或毛細(xì)管柱 填充柱：內(nèi)徑填充柱：內(nèi)徑24mm，長，長110m，內(nèi)裝吸附劑，內(nèi)裝吸附劑 高分子多孔小球或涂漬固定液的載體高分子多孔小球或涂漬固定液的載體 毛細(xì)管柱毛細(xì)管柱：內(nèi)徑：內(nèi)徑0.20.5mm，長，長10100m，一般為空心柱，內(nèi)壁或載體經(jīng)涂漬或一般為空心柱，內(nèi)壁或載體經(jīng)涂漬或 交聯(lián)固定液交聯(lián)固定液檢測器：檢測器：氫火焰離子化檢測器氫火焰離子化檢測器色譜圖：色譜圖：30分鐘內(nèi)記錄完畢分鐘內(nèi)記錄完畢 2.色譜適用性實驗：同色譜適用性實驗：同HPLC 3.測定法：同測定法：同HPLC