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1、r v / T 4 4 8 -2 0 0 1前言本方法能快速檢測蔬菜中有機磷和氨基甲酸醋類農(nóng)藥殘毒本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所負責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人: 高曉輝、 朱光艷、 陶傳江、 秦冬梅、 龔勇、 劉光學(xué)、 何藝兵。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所負責(zé)解釋2 2 3中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)蔬菜上有機磷和氨基甲酸醋類 農(nóng)藥殘毒快速檢測方法N Y / T 4 4 8 一2 0 0 1R a p i d b i o a s s a y o f o r g a n o p h o s p h a t e a n d c a r b a ma t ep e s t i c

2、i d e r e s i d u e s i n v e g e t a b l e s范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了甲胺磷等有機磷和克百威等氨基甲酸醋類農(nóng)藥在蔬菜中的殘毒快速檢測方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于葉菜類( 除韭菜) 、 果菜類、 豆菜類、 瓜菜類、 根菜類( 除胡蘿 卜 、 菱白等) 中甲胺磷、 氧化樂果、 對硫磷、 甲拌磷、 久效磷、 倍硫磷、 殺撲磷、 敵敵畏、 克百威、 涕滅威、 滅多威、 抗蚜威、 丁硫克百威、 甲蔡威、 丙硫克百威、 速滅威、 殘殺威、 異丙威等的農(nóng)藥殘毒快速檢測2 原理 有機磷和氨基甲酸醋類農(nóng)藥能抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酞膽堿酶的活性， 造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酞膽堿的積

3、累， 影響正常傳導(dǎo)， 使昆蟲中毒致死， 根據(jù)這一昆蟲毒理學(xué)原理， 用在對農(nóng)藥殘留的檢測中。 加人反應(yīng)試劑后， 用分光光度計測定吸光值隨時間的變化值， 計算出抑制率， 判斷蔬菜中含有機磷或氨基甲酸酷類農(nóng)藥的殘毒情況。即: 乙酞膽堿醋酶+有機磷或氨基甲酸醋類農(nóng)藥一酶活性被抑制 r 活性被抑制一樣本中含有機磷或氨基甲酸醋類農(nóng)藥乙酞膽堿醋酶 + 樣本提取液 L-活性正常一樣本中不含有機磷或氨墓甲酸酷類農(nóng)藥如以乙酞硫代膽堿( A s C h ) 為底物， 在乙酞膽堿酷酶( A C h E ) 的作用下乙酞硫代膽堿( A s C h ) 水解成硫代膽堿和乙酸， 硫代膽堿和二硫雙對硝基苯甲酸( D T N

4、B ) 產(chǎn)生顯色反應(yīng)， 使反應(yīng)液呈黃色， 在分光光度計4 1 0 n m處有最大吸收峰， 用分光光度計可測得酶活性被抑制程度( 用抑制率表示) 。3 試劑p H 8 磷酸緩沖液。丁酞膽堿醋酶: 根據(jù)酶活性情況按要求用緩沖液溶解， A A值控制在0 . 4 -0 . 8 之間底物: 碘化硫代丁酞膽堿( s - b u t y r y l t h i o c h o l i n e i o d i d e ， 即B T C D， 用緩沖液溶解。顯色劑: 二硫代二硝基苯甲酸 5 , 5 - d i t h i o b i s ( n i t r o b e n z o i c a c i d ， 即

5、D T N B ) ， 用緩沖液溶解引3.233到4 儀器4 . 了 波長為4 工 。n m士3 n n ) 專用速測儀， 或可見光分光光度計。中華人民共和國農(nóng)業(yè)部2 0 0 1 一 0 6 - 0 1 批準(zhǔn)2 0 0 1 門0 一 0 1實施N Y / T 4 4 8 一2 0 0 1電子天平( 準(zhǔn)確度。1 9 )微型樣品混合器臺式培養(yǎng)箱可調(diào)移液槍: ( 1 0 1 0 0 1, L , 1 -5 m l )不銹鋼取樣器( 內(nèi)徑 2 c m) ,配套玻璃儀器及其他配件等。們434445概4.75 檢測5 門取樣 用不銹鋼管取樣器取來 自不同植株葉片( 至少 8 1 0片葉子) 的樣本; 果菜

6、從表皮至果肉 1 -1 . 5 c m 處取樣。5 . 2 檢測過程 取2 g 切碎的樣本( 非葉菜類取4 g ) , 放人提取瓶內(nèi)， 加人2 0 m L緩沖液， 震蕩1 - 2 m i n ， 倒出提取液， 靜止3 - 5 m i n ; 于小試管內(nèi)分別加人5 0 I L酶, 3 m L樣本提取液， 5 0 p L顯色劑， 于3 7 -3 8 C 下放置3 0 m i n后再分別加人5 0 M L底物， 倒人比色杯中， 用儀器進行測定。5 . 3式中檢測結(jié)果計算檢測結(jié)果按式( 1 ) 計算 :抑 制 率 ( 、 ) 尹氣產(chǎn)= x l o o . . . . . . . 。 。 二(1): A

7、 A對照組 3 m i n 后與 3 mi n前吸光值之差;A A , 樣本 3 mi n后與3 m i n前吸光值之差。抑制率)7 0 %時， 蔬菜中含有某種有機磷或氨基甲酸酷類農(nóng)藥殘毒。 此時樣本要有2 次以上重復(fù)檢測， 幾次重復(fù)檢測的重現(xiàn)性應(yīng)在 8 0 %以上6 最低檢出濃度 本方法的最低檢出濃度見表 1 ,表 1農(nóng)藥中文名英文通用名毒性最低檢出濃度( 溶液) m g / L最低檢出濃度 蔬菜) m g / k g甲胺磷高毒1 - 23 5氧化樂果o me t h o a t e高毒0 . 7 22 5對硫磷p a r a t h i o n高毒0 . 7 1 . 52 - 4甲拌磷p

8、h o x me高毒0 . 9 - 0 1 71 - 2久效磷mo n o c r o t o - p h o s高毒0 . 3 - 0 . 71 2倍硫磷f e n t h i o n高毒2 - 2 . 56 7殺撲磷me t h i d a t h i o n高毒2 . 2 . 56 - 7敵敵畏d i c h l o r o v o s中毒0 . 10 . 3克百威c a r b o f u r a n高毒0 . 3 - 0 . 71- - 2涕滅威a l d i c a r b高毒0 . 3 0 . 71 - 2滅多威m e t h o m y l高毒0 . 3y0 . 71 - -

9、2抗蚜威p i r i mi c a r b高毒0 . 5 - 11 . 5 3N Y / T 4 4 8 一 2 0 0 1表 1 ( 完)農(nóng)藥中文名英文通用名毒性最低檢出濃度( 溶液) m g / l最低檢出濃度 蔬菜) m g / k g丁硫克威c a r b o s u l f a n中毒0 . 7 - 12 - 3甲蔡威c a r b a r y l中毒0 . 3 0 . 71 - - 2丙硫克百威b e n f u r a c a r b中毒0 . 3 - 0 . 71 一 2速滅威M TM C中毒0 . 5 - 0 . 81 . 5 - 2 . 5殘殺威p r o P o x u r中毒0 . 3 - 0 . 81 . 5 一 2 . 5異丙威i s o p r o c a r b中毒0 . 5 0 . 81 . 5 - 2 . 5丁酞膽堿醋酶對甲基對硫磷、 樂果、 毒死4*. -0磷等農(nóng)藥不太靈敏， 檢出濃度均在1 0 m g / k g以上。2 26