《SN_T 5120-2019《進(jìn)出口食用動(dòng)物、飼料中亞硝酸鹽測(cè)定 比色法和離子色譜法》.pdf》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《SN_T 5120-2019《進(jìn)出口食用動(dòng)物、飼料中亞硝酸鹽測(cè)定 比色法和離子色譜法》.pdf（7頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)趨R文網(wǎng)上搜索。

1、N/T5120權(quán)所有禁止翻制、電子傳閱、發(fā)售容量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻備用3.3儀器分光光度計(jì)332分析天平:感量0.0001g33.3恒溫水浴鍋33.4渦旋混合器4分析步驟34.1試樣制備3.4.1.1飼料:按照GB/T14699.1采集代表性樣品,按照GB/T20195制備飼料試樣供實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)使用3.4.1.2血液:采集動(dòng)物血液10mL,室溫靜置約30min,使血液自然凝固。必要時(shí),5000r/min離心收集上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中備用3.4.1.3尿液:取動(dòng)物新鮮尿液50mL,混勻,5000r/min離心10min后取上清液備用3.4.2提取凈化粗飼料:稱(chēng)取試樣(精確至0.01g),

2、置于100mL具塞比色管中,加60mL水,渦旋混勻,置于70水浴中加熱15min,取出冷卻,轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中,定容,靜置15min,過(guò)濾,棄去初濾液25mL,收集備用3.4.2.2配合飼料、魚(yú)粉、酵母蛋白等:稱(chēng)取35g勻質(zhì)試樣(精確至0.01g),置于100mL具塞比色管中,加60mL水混勻,加入2.0mL氫氧化鈉溶液(3.2.4),置于70水浴中加熱n,取出冷卻,轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中,加8.omL乙酸鋅溶液(3.2.5)混勻以沉淀蛋白,定容,靜置15min,除去上層脂肪過(guò)濾,棄去初濾液收集備用4.2.3血液、尿樣:準(zhǔn)確吸取2.0mL勻質(zhì)試樣,置于100mL具塞比色管中,加60mL

3、水和2.0mLNaOH溶液(3.2.4)混勻,置于70水浴中加熱15min,取出冷卻,轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中,加入酸鋅溶液(3.2.5)混勻以沉淀蛋白,定容,靜置15min,過(guò)濾,棄去初濾液25mL,收集備用3.4.3亞硝酸鹽的測(cè)定吸取0.0,0.25,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5,.0mL亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)工作液(3.2.9)到25mL容量瓶中(相當(dāng)于配制0、2.5、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0g亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)系列),分別加入4.0mL氯化銨緩沖液(3.2.3)和1.0mL鹽酸,立即加入2.0mL對(duì)氨基苯磺酸溶液(3.2.6)和2.0mL鹽酸萘乙二胺溶液(

4、3.2.7)進(jìn)行顯色,加水至刻度,混勻,靜置10min,用2cm比色杯,以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn),于538mm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,以吸光度為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)溶液中所含亞硝酸鹽質(zhì)量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同樣方法,取0mL提取凈化后的試液(3.4.2)于L容量瓶中,分別加人4.0mL氯化銨緩沖液(3.2.8)和1.mI鹽酸,立即加入2.0mL對(duì)氨基苯磺酸溶液(3.2.6)和2.omL鹽酸萘乙二胺溶液(3.2.7)進(jìn)行顯色,用水定容至刻度,混勻,靜置10min,上機(jī)測(cè)定3.5結(jié)果計(jì)算試樣中亞硝酸鹽的含量按式(1)進(jìn)行計(jì)算N/T5120權(quán)所有禁止翻制、電子傳閱、發(fā)售4.4.2凈化將4.4.1中的上清液依次通過(guò)固相萃

5、取柱C18柱(或HLB柱)、Ag柱凈化,棄去前面收集后面洗脫液,過(guò)0.22m水性濾膜后上機(jī)。固相萃取柱使用前需進(jìn)行活化,C8柱(或HLB柱)使用前依次用10mL甲醇、10mL水通過(guò),靜置活化20Ag柱使用前用10mL水靜置活化20min4.4.3參考色譜條件4.4色譜柱:高容量陰離子交換柱,如 Dionex lon pac as19250mm4mm(帶 Ion Pac AG19保護(hù)柱50mm4mm),或性能相當(dāng)?shù)碾x子色譜柱4.4.3.2淋洗液:氫氧化鉀溶液,濃度為6mmol/L70 mmol/I(或者使用在線KOH淋洗發(fā)生器);洗脫梯度為6mmol/L35min,70mmol/L6mmol/L

6、5min;流速1.0mL/min4.4抑制器:連續(xù)自動(dòng)再生膜陰離子抑制器或等效抑制裝置4.3.4檢測(cè)器:電導(dǎo)檢測(cè)器,檢測(cè)池溫度為354.4.3.5進(jìn)樣體積:250L(可根據(jù)試樣中被測(cè)離子含量進(jìn)行調(diào)整)4.4.4測(cè)定吸取亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)系列溶液依次注入離子色譜儀進(jìn)行檢測(cè),保留時(shí)間定性,亞硝酸鹽濃度為橫坐標(biāo),以峰高(S)或峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別吸取空白和試樣溶液50L,在相同工作條件下,依次注入離子色譜儀中,記錄色譜圖(參見(jiàn)附錄A)Wang.Cn4.5結(jié)果計(jì)算按式(2)計(jì)算試樣中亞硝酸鹽的含量(C-C0)V試樣中亞硝酸鹽的含量,mg/kg或mg/L試樣中亞硝酸鹽的濃度,mg/I試劑空白液中亞硝酸鹽的濃度,mg定容體積,ml取樣質(zhì)量或體積,g或mI計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字4.6精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%