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1、SN/T14792004前言本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A和附錄B為資料性附錄本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會(huì)提出并歸口本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)上海出人境檢驗(yàn)檢疫局負(fù)責(zé)起草本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:郭德華、葉長(zhǎng)淋、李波、朱暢本標(biāo)準(zhǔn)系首次發(fā)布的出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T1479-20043.2.2甲烷3.2.3甲醇:液相色譜純3.2.4醋酸鹽緩沖液:溶解4.95g無水乙酸鈉及0.95g一水對(duì)甲苯磺酸于900mL水中,用冰醋酸調(diào)節(jié)溶液pH到4.5,最后用水稀釋到3.2.520%質(zhì)量分?jǐn)?shù))鹽酸羥胺水溶液:溶解12.5g鹽酸羥胺在50mL水中2%鹽酸羥胺甲醇溶液:準(zhǔn)確移取1mL20%鹽酸羥胺水溶液到100mL容量瓶,用甲

2、醇準(zhǔn)確定容至刻度線3.2.71.0mo/L對(duì)甲苯磺酸:稱取17.2g一水對(duì)甲苯磺酸,并用水稀釋至100mL3.2.8二甘醇3.2.9酸性氧化鋁:80百120目2.10二氧化鉛藻土:色譜層析級(jí)3.2.12孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品:純度98%3.2.13孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取適量的孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇配成濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液3.2.14隱色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品:純度98%。2.15隱色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取適量的隱色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇配成濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液3.2.16孔雀石綠和隱色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)混合溶液:準(zhǔn)確移取適量上述兩種標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,用甲醇配成濃度為10pg/mL的標(biāo)準(zhǔn)混合液3

3、.3儀器和設(shè)備ulwenwang. cn3.3.1高效液相色譜儀:配有紫外可見光檢測(cè)器高效液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜儀。3.3.3高速均質(zhì)器。3.3.4離心機(jī):3000r/min3.3.5固相萃取裝置3.3.625%PbO2氧化柱:空的不銹鋼預(yù)柱管,3cm4mm(內(nèi)徑),兩端覆以2pm的過濾板,在抽真空的情況下,把含有25%PbO2的Cele硅膠裝柱,添加數(shù)滴甲醇后壓實(shí)后旋緊。臨用前用甲醇沖洗。將PbO2氧化柱連接在紫外可見光檢測(cè)器與液相色譜柱之間3.3.7丙磺酸( RRS- SPE)固相萃取小柱:500mg, Bond Elut lro,或相當(dāng)者3.3.8中性氧化鋁固相萃取小柱:1g, Supecl

4、ean LC-alummina-N,或相當(dāng)者3.3.9離心管:50mL,100mL,具塞3.4測(cè)定步驟提取準(zhǔn)確稱取5.0g樣品于50mL離心管內(nèi),加入1.5mL20%的鹽酸羥胺水溶液、2.5mL1.0mol/L的對(duì)甲苯磺酸溶液、5.0mL乙酸鹽緩沖溶液,用均質(zhì)機(jī)以1500r/min的速度均質(zhì)30s,加人10mL乙腈后劇烈震搖30s。再加入10g酸性氧化鋁,再次震蕩30s。將離心管置于離心機(jī)內(nèi)以300r/min的速度離心10min。把上清液轉(zhuǎn)移至裝有10mL水和2mL二甘醇的100mL離心管中。然后在50mL離心管中加入10mL乙腈,重復(fù)上述操作,將上清液轉(zhuǎn)移至同一100mL離心管中3.4.2凈

5、化在離心管中加入15mL二氯甲烷,振蕩10s后,置于離心機(jī)內(nèi)以3000r/min的速度離心10min用尖嘴移液管將下層溶液轉(zhuǎn)移至100mL的梨形燒瓶中,再用10mL二氯甲烷重復(fù)上述操作一次,合并二氯甲烷層于同一梨形燒瓶中。于45旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約1mL,用5mL乙腈溶解殘?jiān)黃N/T14792004將PRS固相萃取小柱安裝在固相萃取裝置上,PRS小柱上端再連接中性氧化鋁固相萃取小柱,用mL乙腈活化小柱,把燒瓶中的溶液轉(zhuǎn)移到小柱上,在抽真空情況下過柱,再用乙腈洗滌燒瓶?jī)纱?每次2.5mL,把洗滌液依次通過柱,棄去中性氧化鋁小柱。在不抽真空的情況下,依次準(zhǔn)確用1mL流動(dòng)相、1mL流動(dòng)相和1mL鹽酸羥胺甲醇

6、溶液洗脫P(yáng)RS柱,把洗脫液收集到5mL刻度試管中,用流動(dòng)相稀釋至3mL,過0.45m微孔濾膜,濾液供液相色譜測(cè)定3.4.3標(biāo)準(zhǔn)工作液的配置根據(jù)需要,準(zhǔn)確移取適量標(biāo)準(zhǔn)混合液于5mL刻度試管中,放在40加熱板上用氮?dú)饬鞔蹈?準(zhǔn)確加入1mL鹽酸羥胺甲醇溶液,用流動(dòng)相稀釋至3mL,混勻3.4.4測(cè)定3.4.4.1液相色譜條件a)色譜柱:氰基柱,150mm4.6mm(內(nèi)徑),填充物粒度10m,或桕當(dāng)者,在氰基色譜柱和檢測(cè)器之間連接25%PbO2氧化柱;b)流動(dòng)相:乙腈-乙酸鹽緩沖液(55+45)c)流速:2.0mL/mind)柱溫:室溫;e)檢測(cè)波長(zhǎng):618nm;f)進(jìn)樣量:5024.4.2色譜測(cè)定根據(jù)

7、樣液中被測(cè)孔雀石綠或隱色孔雀石綠含量情況,選定峰高相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液中孔雀石綠或隱色孔雀石綠響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)線性范圍內(nèi)。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液等體積參插進(jìn)樣測(cè)定。在上述色譜條件下,孔雀石綠和隱色孔雀石綠的保留時(shí)間約為5.8min和2.8min標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖參見附錄A中圖A.13.4.5確證3.4.5.1液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜條件a)色譜柱:ODS,250mm2.0mm,或相當(dāng)者,在色譜柱和檢測(cè)器之間連接25%PbO2氧化柱;b)流動(dòng)相:0.05mol/L乙酸銨(pH4.5)-乙腈(25+75);mind)柱溫:室溫;e)進(jìn)樣量:50Lf)電離方式:ES+;g)毛細(xì)管電壓:2.9

8、kV;h)錐體電壓:55Vi)離子源溫度:120)干燥溫度:350k)霧化氣流量:90L/Hr;)干燥氣流量:490L/Hm)碰撞能量:30eV;n)測(cè)定方式:TOF;o)母離子(m/z):329,碎片離子(m/z):313,2084.5.2液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜確證對(duì)3.4.2和3.4.3中最后所得的樣液及標(biāo)準(zhǔn)液,用2mL二氯甲烷提取,移取二氯甲烷層并揮干,準(zhǔn)確加入1.0mL流動(dòng)相以溶解殘?jiān)?按3規(guī)定的條件進(jìn)行測(cè)定。如果樣液中與標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的保留時(shí)間有監(jiān)測(cè)離子峰出現(xiàn),則對(duì)其進(jìn)行質(zhì)譜確證。標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜圖見附錄B中圖B1、圖B.2、圖B.3。SN/T1479-20043.4.6空白試驗(yàn)除不加試樣外,

9、均按上述測(cè)定步驟進(jìn)行3.4.7結(jié)果計(jì)算和表述結(jié)果計(jì)算用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按式(1)計(jì)算樣品中孔雀石綠或隱色孔雀石綠殘留含量X樣品中孔雀石綠或隱色孔雀石綠含量,單位為微克每千克(pg/kg);m孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)工作液或隱色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)工作液的質(zhì)量,單位為納克(ng);樣品中孔雀石綠或隱色孔雀石綠的峰高,單位為毫米(mm)H孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)工作液或隱色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)工作液的峰高,單位為毫米(mm);試樣量,單位為克(g)計(jì)算結(jié)果需扣除空白值測(cè)定結(jié)果的表述本檢驗(yàn)方法的殘留量測(cè)定結(jié)果系指孔雀石綠和它的代謝物隱色孔雀石綠殘留量的之和,以孔雀石綠表4測(cè)定低限、回收率4.1測(cè)定低限本方法中采用HPICIS法孔雀石綠的測(cè)

10、定低限為2g/kg9.C本方法中采用 HPLC-MS/MS法孔雀石綠的測(cè)定低限為1gg/kg本方法中采用 HPLC-VIs法孔雀石綠的測(cè)定低限為2pg/kg本方法中采用 HPLC-MS/MS法孔雀石綠的測(cè)定低限為1Hg/4.2回收率鰻魚中孔雀石綠及其代謝物隱色孔雀石綠的添加濃度及其回收率的HPLCIS實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)在2g/kg時(shí),孔雀石綠的回收率為85.5%隱色孔雀石綠的回收率為87.0%;在25g/kg時(shí),孔雀石綠的回收率為90.0%,隱色孔雀石綠的回收率為88.0%;在200g/kg時(shí),孔雀石綠的回收率為87.0%隱色孔雀石綠的回收率為8.5%(資料性附錄標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖隱色孔雀石綠孔雀石綠圖A.1

11、孔雀石綠及隱色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜圖SN/T1479-2004251.19193138嗎14180200220240250280300320340360380400420440460480500圖B.3隱色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)sN/T1479-2004ForewordAnnex a and annex b of this standard is an informative annexThis standard was proposed by and is under the charge of the Certification and Accreditation Administration

12、of the Peoples Republic of chinahis standard was drafted by Shanghai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the PeoplesRepublic of chinaThe main drafters of this standard are Guo dehua, Ye Changlin, Li Bo and Zhu ChangThis standard is a professional standard promulgated for the first Note: this English version, a translation from the Chinese text is solely for guidance