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1、8、微生物的快速檢測(cè)、微生物的快速檢測(cè)常見(jiàn)微生物檢測(cè)項(xiàng)目常見(jiàn)微生物檢測(cè)項(xiàng)目常規(guī)微生物項(xiàng)目：細(xì)菌總數(shù)、大腸菌群、常規(guī)微生物項(xiàng)目：細(xì)菌總數(shù)、大腸菌群、大腸桿菌、酵母總數(shù)、霉菌總數(shù)。大腸桿菌、酵母總數(shù)、霉菌總數(shù)。致病微生物項(xiàng)目：沙門(mén)氏菌、李斯特菌、致病微生物項(xiàng)目：沙門(mén)氏菌、李斯特菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌金黃色葡萄球菌、大腸桿菌O157O157：H7H7、彎曲桿菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志彎曲桿菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志賀氏菌、假單胞菌等。賀氏菌、假單胞菌等。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 4789 1-40GB/T 4789 1-40：食品衛(wèi)生微生物學(xué)：食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)：菌落總數(shù)測(cè)定、大腸菌群計(jì)

2、數(shù)、沙門(mén)氏檢驗(yàn)：菌落總數(shù)測(cè)定、大腸菌群計(jì)數(shù)、沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)、志賀氏菌檢驗(yàn)、致泄大腸埃希氏菌檢菌檢驗(yàn)、志賀氏菌檢驗(yàn)、致泄大腸埃希氏菌檢驗(yàn)、副溶血性弧菌檢驗(yàn)、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏驗(yàn)、副溶血性弧菌檢驗(yàn)、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)、空腸彎曲菌檢驗(yàn)、金黃色葡萄球菌檢菌檢驗(yàn)、空腸彎曲菌檢驗(yàn)、金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)、溶血性鏈球菌檢驗(yàn)、肉毒梭菌及肉毒毒素驗(yàn)、溶血性鏈球菌檢驗(yàn)、肉毒梭菌及肉毒毒素檢驗(yàn)、產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)、蠟樣芽孢桿菌檢驗(yàn)、檢驗(yàn)、產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)、蠟樣芽孢桿菌檢驗(yàn)、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)、常見(jiàn)產(chǎn)毒霉菌的鑒定、椰霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)、常見(jiàn)產(chǎn)毒霉菌的鑒定、椰毒假單胞菌酵米面亞種檢驗(yàn)、單核細(xì)胞增生李毒假單胞菌酵米面亞種檢驗(yàn)、

3、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)、腸桿菌科噬菌體檢驗(yàn)、大腸菌斯特氏菌檢驗(yàn)、腸桿菌科噬菌體檢驗(yàn)、大腸菌群快速測(cè)定、雙歧桿菌檢驗(yàn)、乳酸菌檢驗(yàn)、大群快速測(cè)定、雙歧桿菌檢驗(yàn)、乳酸菌檢驗(yàn)、大腸埃希氏菌腸埃希氏菌O157O157：H7/NMH7/NM檢驗(yàn)、阪崎腸桿菌檢檢驗(yàn)、阪崎腸桿菌檢驗(yàn)等。驗(yàn)等。政府檢測(cè)機(jī)構(gòu)為什么需要微生物快速檢測(cè)？提高檢測(cè)效率節(jié)約人力資源成本與國(guó)際接軌國(guó)內(nèi)外食品安全形勢(shì)嚴(yán)峻，惡性事件不斷發(fā)生。歐洲“二噁英”、“瘋牛病”（20世紀(jì)90年代）日本大腸桿菌O157:H7中毒（1996）中國(guó)SARS（2003）、東南亞國(guó)家禽流感（2004）美國(guó)菠菜大腸桿菌O157:H7污染事件（2006）日益嚴(yán)峻的

4、食品安全局勢(shì)的需要企業(yè)為什么需要微生物快速檢測(cè)？市場(chǎng)銷(xiāo)售環(huán)節(jié)要求快速出貨。尤其是一些保質(zhì)期較短的產(chǎn)品。減少物流的壓力，盡可能減少倉(cāng)存，加快資金周轉(zhuǎn)。節(jié)約人力資源成本（外資企業(yè)尤其突出）對(duì)于運(yùn)行HACCP質(zhì)量保證體系的企業(yè)來(lái)說(shuō)，快速檢測(cè)方法尤其重要?？梢钥焖贆z測(cè)原料及半成品的污染情況，以采取相應(yīng)的措施控制最終產(chǎn)品的微生物超標(biāo)情況。快速檢測(cè)方法勢(shì)在必行！國(guó)外許多政府檢測(cè)機(jī)構(gòu)都在大量使用快速檢測(cè)方法，尤其是ATP法、免疫法、阻抗法和顯色培養(yǎng)基法在國(guó)外應(yīng)用相當(dāng)成功。國(guó)內(nèi)的許多政府檢測(cè)機(jī)構(gòu)也都已經(jīng)在使用或正在考慮使用國(guó)外先進(jìn)的快速檢測(cè)技術(shù)。從長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展趨勢(shì)來(lái)說(shuō)，快速方法是微生物檢測(cè)的一大方向。一、常規(guī)微生

5、物快速檢測(cè)技術(shù)現(xiàn)狀一、常規(guī)微生物快速檢測(cè)技術(shù)現(xiàn)狀傳統(tǒng)計(jì)數(shù)改良法：1、螺旋平板計(jì)數(shù)法：螺旋接種儀菌落計(jì)數(shù)2、濾膜法：常用于一些可過(guò)濾樣品的檢測(cè)。3、紙片法：培養(yǎng)基固定在載體上。省去制做培養(yǎng)基的時(shí)間。主要用于細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)。4、其它：如Simplate即用膠,改良MPN產(chǎn)品。螺旋平板法螺旋平板法DWS螺旋平板接種儀aColyte自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀螺旋平板原理螺旋平板原理平皿旋轉(zhuǎn)接種針往外移動(dòng)同時(shí)自動(dòng)將樣品稀釋1000倍螺旋平板法的優(yōu)缺點(diǎn)螺旋平板法的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：與傳統(tǒng)方法相比，無(wú)需稀釋與傳統(tǒng)方法相比，無(wú)需稀釋3 3個(gè)梯度，個(gè)梯度，每個(gè)梯度倒每個(gè)梯度倒2 2個(gè)平板，節(jié)省了大量人力物個(gè)平板，節(jié)省了大量人

6、力物力。力。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：檢測(cè)時(shí)間檢測(cè)時(shí)間并沒(méi)有縮短并沒(méi)有縮短，菌落總數(shù)仍需，菌落總數(shù)仍需要培養(yǎng)要培養(yǎng)4848小時(shí)。小時(shí)。需要配合自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀，否則人工需要配合自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀，否則人工計(jì)數(shù)更麻煩。計(jì)數(shù)更麻煩。濾濾 膜膜 法法濾膜法常用于可過(guò)濾樣品的微生物檢測(cè)。優(yōu)點(diǎn)：靈敏度增大，菌落無(wú)擴(kuò)散情況，便于計(jì)數(shù)。缺點(diǎn)：需要額外的支出購(gòu)買(mǎi)真空泵，多聯(lián)支架及一次性濾膜；如果抽濾過(guò)程空氣潔凈度不夠，有可能造成二次污染，尤其是對(duì)菌數(shù)要求特別嚴(yán)格的產(chǎn)品，如啤酒，澄清果汁，桶裝飲用水等。皿膜法皿膜法以以紙片法紙片法為代表為代表優(yōu)點(diǎn)：無(wú)需制備培養(yǎng)基，攜帶方便，非漫延菌落計(jì)數(shù)較方便。缺點(diǎn)：不能節(jié)省檢測(cè)時(shí)間。檢測(cè)成本相對(duì)

7、偏高。大腸菌群紙片存在與MPN法無(wú)法對(duì)應(yīng)的問(wèn)題，金黃色葡萄球菌紙片存在取樣量太低的問(wèn)題。目前僅細(xì)菌總數(shù)紙片有一些用戶。紙片法是目前被廣泛接受的方法。國(guó)標(biāo)餐具大腸菌群采用的就是紙片法。其它即用膠，其它即用膠，MPN改良法改良法Simplatecolilert主要用于水樣或澄清樣品的大腸菌群或大腸桿菌檢測(cè)SimPlateSimPlateTMTMTPCTPC 法：基于食源性細(xì)菌的蛋白質(zhì)法：基于食源性細(xì)菌的蛋白質(zhì)有特異性酶類(lèi)，有特異性酶類(lèi)，TPCTPC培養(yǎng)基內(nèi)含有多種細(xì)菌酶培養(yǎng)基內(nèi)含有多種細(xì)菌酶類(lèi)所對(duì)應(yīng)的底物。檢樣被細(xì)菌污染時(shí)，只要具類(lèi)所對(duì)應(yīng)的底物。檢樣被細(xì)菌污染時(shí)，只要具有一種酶的活性即能與底物作用

8、生成有一種酶的活性即能與底物作用生成4-4-甲基傘甲基傘形酮，培養(yǎng)形酮，培養(yǎng)24h24h后，在紫外線照射下，發(fā)出藍(lán)后，在紫外線照射下，發(fā)出藍(lán)色熒光。色熒光。食源性細(xì)菌懸浮于食源性細(xì)菌懸浮于TPCTPC培養(yǎng)基表面，在分隔的培養(yǎng)基表面，在分隔的小池內(nèi)能迅速進(jìn)行生化反應(yīng)，若有檢樣顆粒亦小池內(nèi)能迅速進(jìn)行生化反應(yīng)，若有檢樣顆粒亦無(wú)干擾；它不是由無(wú)干擾；它不是由48h48h形成的菌落來(lái)計(jì)數(shù)，而形成的菌落來(lái)計(jì)數(shù)，而是是24h24h后在紫外燈照射下記錄培養(yǎng)皿內(nèi)能發(fā)出后在紫外燈照射下記錄培養(yǎng)皿內(nèi)能發(fā)出藍(lán)色熒光的陽(yáng)性池?cái)?shù)，進(jìn)而由最大近似值藍(lán)色熒光的陽(yáng)性池?cái)?shù)，進(jìn)而由最大近似值(MPN)(MPN)表查出細(xì)菌的表查出細(xì)

9、菌的MPNMPN。陽(yáng)性池?cái)?shù)與。陽(yáng)性池?cái)?shù)與MPN MPN 呈呈松泊分布。松泊分布。固定底物技術(shù)酶底物法，需要固定底物技術(shù)酶底物法，需要coliertcoliert試試劑劑采用大腸菌群細(xì)菌能產(chǎn)生采用大腸菌群細(xì)菌能產(chǎn)生D-D-半乳糖苷酶半乳糖苷酶分解分解ONPGONPG（鄰硝基苯（鄰硝基苯-D-D-半乳吡喃糖苷）半乳吡喃糖苷）使培養(yǎng)液呈黃色，以及大腸埃希氏菌產(chǎn)使培養(yǎng)液呈黃色，以及大腸埃希氏菌產(chǎn)生生D-D-葡萄糖醛酸酶分解葡萄糖醛酸酶分解MUGMUG（4-4-甲基傘形甲基傘形酮酮-D-D-葡萄糖醛酸苷葡萄糖醛酸苷 ）使培養(yǎng)液在波長(zhǎng)）使培養(yǎng)液在波長(zhǎng)366nm366nm紫外光下產(chǎn)生熒光的原理，來(lái)判斷紫外光

10、下產(chǎn)生熒光的原理，來(lái)判斷水樣水樣中是否含有大腸菌群及大腸埃希氏中是否含有大腸菌群及大腸埃希氏菌。只需菌。只需2424小時(shí)即可同時(shí)定量出水樣中小時(shí)即可同時(shí)定量出水樣中大腸菌群和大腸埃希氏菌的大腸菌群和大腸埃希氏菌的MPNMPN值。值。二、常規(guī)微生物快速檢測(cè)技術(shù)現(xiàn)狀二、常規(guī)微生物快速檢測(cè)技術(shù)現(xiàn)狀快速檢測(cè)微生物數(shù)量的新方法：1、ATP法：目前產(chǎn)品較多，如CHARM，Biotrace,.等。2、電化學(xué)法：Sy-Lab公司Bactrac4300，Tempo,3、顏色變化：如梅里埃的Bact/Alert和Foss的MicroFoss。4、流式細(xì)胞技術(shù)及激光掃描技術(shù)5、其它：熱量法，放射測(cè)量法表面潔凈的檢測(cè)

11、方法微生物學(xué)法：紙片、瓊脂板、棉簽拭子、海綿拭子非微生物學(xué)法（快速法）：ATP(三磷酸腺苷，蛋白質(zhì),降解糖、NADP(輔酶II)，其它。ATP-ATP-三磷酸腺苷三磷酸腺苷三磷酸腺苷三磷酸腺苷ATP來(lái)源于細(xì)菌細(xì)菌酵母酵母 霉菌霉菌生物膜生物膜組織殘留組織殘留廢棄物污染人的污染（一）（一）ATPATP法法1.人接觸設(shè)備或器具人接觸設(shè)備或器具2.設(shè)備或器具被污染設(shè)備或器具被污染3.清洗不正常清洗不正常4.非正常的敏感物污染非正常的敏感物污染5.微生物污染微生物污染檢測(cè)原理熒光素?zé)晒馑孛赶佘找涣姿嵫鹾蠠晒馑責(zé)晒釧TP法兩大法兩大用途用途1、用于食品、化妝品和藥品企業(yè)對(duì)生產(chǎn)線和管道進(jìn)行快速清潔程度檢測(cè)

12、。政府檢測(cè)機(jī)構(gòu)用ATP方法缺乏法律依據(jù)。ATP法與微生物數(shù)量沒(méi)有必然的聯(lián)系。2、改良后用于食品、化妝品的商業(yè)無(wú)菌檢測(cè)或終產(chǎn)品檢驗(yàn)。LUMT清潔程度快速檢測(cè)1)1)將水樣在玻璃纖維過(guò)濾器上過(guò)濾以便富集微生物；將水樣在玻璃纖維過(guò)濾器上過(guò)濾以便富集微生物；2)2)用適當(dāng)?shù)娜芙鈩┤芙饧?xì)胞；用適當(dāng)?shù)娜芙鈩┤芙饧?xì)胞；3)3)用適當(dāng)?shù)妮腿┹腿∮眠m當(dāng)?shù)妮腿┹腿TPATP；4)4)將將ATPATP的萃取液加到盛有螢光素、螢光素酶的試管中，的萃取液加到盛有螢光素、螢光素酶的試管中，并用光度計(jì)記錄下所產(chǎn)生光的量，將此讀數(shù)和并用光度計(jì)記錄下所產(chǎn)生光的量，將此讀數(shù)和ATPATP濃度標(biāo)濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較，就可得到待

13、測(cè)樣品中準(zhǔn)曲線相比較，就可得到待測(cè)樣品中ATPATP含量；用得到的含量；用得到的ATPATP含量確定水樣中細(xì)菌數(shù)量。含量確定水樣中細(xì)菌數(shù)量。LUM-T的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)CHEF熟肉制品成熟度檢驗(yàn)MicroQ水中微生物污染程度檢測(cè)Cidelite殺蟲(chóng)劑殘留初篩Paslite牛奶巴氏消毒效果Somalite體細(xì)胞計(jì)數(shù)SL/MRLtest抗生素殘留檢測(cè)（連接ROSAimager)Charm ATP 檢測(cè)檢測(cè)基于基于ATP原理的用于成品檢測(cè)的原理的用于成品檢測(cè)的微生物檢測(cè)系統(tǒng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)CharmLUM-96（用于UHT產(chǎn)品-高溫瞬間滅菌）BiotraceCelsis（主要用于化妝品）Millipore公司

14、的MicroScanCelsis和和LUM-96保溫2天，檢測(cè)30分鐘（96個(gè)樣）ATP法檢測(cè)成品的優(yōu)缺點(diǎn)法檢測(cè)成品的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：LUM-96通常用于進(jìn)行商業(yè)無(wú)菌檢測(cè)?？纱蟠罂s短庫(kù)存時(shí)間，減少物流壓力和成本。缺點(diǎn)：ATP方法需要消耗大量的較昂貴的試劑，對(duì)儀器的清洗保養(yǎng)要求特別高。另外，客戶通常懷疑假陰性的可能，特別是用ATP單個(gè)檢測(cè)代替常規(guī)微生物和致病微生物檢測(cè)，其風(fēng)險(xiǎn)是一定存在的。(如保溫增菌時(shí)間不夠，菌數(shù)未達(dá)到一定數(shù)量，取樣量太小，由于培養(yǎng)基原因，目標(biāo)致病菌未大量增菌等原因)Millipore公司最新推出的公司最新推出的MicroStarMicroStar的原理及局限性的原理及局限性Mic

15、roStar快速微生物檢測(cè)系統(tǒng)是結(jié)合了生物熒光、膜過(guò)濾及CCD熒光照相檢測(cè)等技術(shù)的新型檢測(cè)系統(tǒng).可過(guò)濾樣品經(jīng)膜過(guò)濾后，將菌截留在特殊的濾膜上，濾膜放置在培養(yǎng)基表面增菌后取出，加ATP釋放劑，然后加熒光素和熒光素酶，顯示的熒光信號(hào)在熒光顯微鏡或熒光檢測(cè)器下觀察并計(jì)數(shù)。MicroStar的優(yōu)缺點(diǎn)的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：縮短培養(yǎng)時(shí)間，提高靈敏度。適合于菌數(shù)較低的可過(guò)濾產(chǎn)品使用。缺點(diǎn)：儀器較昂貴，運(yùn)行成本也非常貴。不能用于檢測(cè)未知的可能菌數(shù)較高的樣品(不知稀釋多少倍，因菌數(shù)必須稀釋至80個(gè)左右)。整個(gè)檢測(cè)時(shí)間還不夠快，通常需16小時(shí)以上。（二）電化學(xué)方法（二）電化學(xué)方法(電導(dǎo)率法或電阻抗法電導(dǎo)率法或電阻抗法)奧

16、地利Sylab公司的Bactrac4300和Biotrac4200梅里埃公司的Bactometer和Tempo英國(guó)Multhus公司(已倒閉)英國(guó)DWS公司的Rabit外觀比較外觀比較Bactrac4300梅里埃的BactoMeterDWS公司的Rabit馬色斯120世界上最好的電化學(xué)微生物快速檢測(cè)產(chǎn)品世界上最好的電化學(xué)微生物快速檢測(cè)產(chǎn)品Bactrac 4300系統(tǒng)系統(tǒng)Sy-labBactrac4300常規(guī)微生物項(xiàng)目快速檢測(cè)技術(shù)MicroFoss(Biosys)微生物自動(dòng)監(jiān)測(cè)儀微生物自動(dòng)監(jiān)測(cè)儀微生物生長(zhǎng)導(dǎo)致培養(yǎng)基pH值發(fā)生變化，由光學(xué)檢測(cè)器檢測(cè)底部瓊脂層的顏色變化，記錄達(dá)到突變點(diǎn)的時(shí)間。Microfoss的特點(diǎn)的特點(diǎn)與阻抗法類(lèi)似，可以實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)。缺點(diǎn)：需要購(gòu)買(mǎi)原廠的預(yù)裝培養(yǎng)基，應(yīng)用范圍受限制，成本高昂。因此在我國(guó)目前還沒(méi)有用戶。梅里梅里埃的埃的BacT/Alert微生物檢測(cè)儀微生物檢測(cè)儀基于微生物生成產(chǎn)生CO2的原理。CO2積累越多，底部的CO2傳感器變黃，由LED發(fā)射一束光至底部，探頭檢測(cè)反射光的強(qiáng)度。光強(qiáng)度與微生物數(shù)量有一定關(guān)系。方法較新，用戶還需要一個(gè)過(guò)程了解。流式流式細(xì)胞計(jì)數(shù)