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1、1、白血病免疫分型vFAB主要依據(jù)形態(tài)學(xué)和細(xì)胞化學(xué)進(jìn)行分型。vMIC方案在FAB方案基礎(chǔ)上結(jié)合了免疫學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)。（M：形態(tài)學(xué) I：免疫學(xué) C：細(xì)胞遺傳學(xué)）1KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity免疫分型與FAB的關(guān)系vFAB分型受檢查者的主觀因素影響大，符合率有一定限制。v免疫標(biāo)志能夠提供正常細(xì)胞在演變成惡性腫瘤過(guò)程中細(xì)胞基因及抗原標(biāo)志發(fā)生變化的信息，而這種變化常常是細(xì)微的，以至于常規(guī)FAB方法不能分辨。v免疫分型是MIC的重要組成部分，它是對(duì)FAB分型的補(bǔ)充。2KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversityv屬于

2、同一種FAB型的病例，可能具有不同的免疫表型。v免疫表型在AML和ALL上與FAB的不一致并不減低免疫分型在白血病患者的應(yīng)用價(jià)值，相反，免疫表型使我們對(duì)血液腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特征有了更深入和更精確的認(rèn)識(shí)。v免疫表型對(duì)腫瘤的診斷、治療策略的制定、預(yù)后判斷及腫瘤發(fā)病機(jī)制的研究都具有重要作用。3KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity免疫分型的兩個(gè)階段v根據(jù)白血病細(xì)胞表達(dá)的系列相關(guān)抗原，確定其系列來(lái)源。如：淋系T/B、粒單系、紅系、巨核系等。v根據(jù)白血病細(xì)胞表達(dá)的系列分化其相關(guān)抗原進(jìn)一步分型。如：早前B，前B，普通B4KeylabofMedicineSchool

3、ofSuZhouUniversity急性白血病的四大免疫類型v單表型急性白血病v表達(dá)某一個(gè)系列抗原為主的急性白血病v雙表型/雙克隆急性白血病v未分化型急性白血病5KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity急性白血病的免疫學(xué)系列分型急性白血病的免疫學(xué)系列分型 類 型 系 列 積 分 B系 T系 粒單系 巨核系 紅系1.單表型 純B-ALL 2 0 0 0 0 純T-ALL 0 2 0 0 0 純AML 0 0 2 0 0 純AML-M6 0 0 2 2 2 純AML-M7 0 0 2 2 2 6KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUn

4、iversity急性白血病的免疫學(xué)系列分型急性白血病的免疫學(xué)系列分型 類 型 系 列 積 分 B系 T系 粒單系 巨核系 紅系2.單表型為主 My+B-ALL 2 0 2 0 0 My+T-ALL 0 2 2 0 0 Ly+AML 2 2 2 2 2 T+B-ALL 2 2 0 0 0 注:My+:髓系抗原陽(yáng)性;Ly+:淋系抗原陽(yáng)性7KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity急性白血病的免疫學(xué)系列分型急性白血病的免疫學(xué)系列分型 類 型 系 列 積 分 B系 T系 粒單系 巨核系 紅系3.雙表型/雙克隆型 T/B 2 2 0 0 0 T/M 0 2 2 0

5、0 B/M 2 0 2 0 0 4.未分化型 AUL 2 2 2 2 28KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversityB B細(xì)胞系細(xì)胞系A(chǔ)LLALL的免疫分型的免疫分型亞亞型型CD19CD20HLA-DRCD10CyIgSmIgFAB分型分型早前B-ALL+L1,L2前B-ALL+/+L1普通B-ALL+/+L1,L2成熟B-ALL+/+L39KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity T細(xì)胞系細(xì)胞系A(chǔ)LL的免疫分型的免疫分型 亞型 CD7 CD2 TdT FAB分型早前T-ALL +L1,L2 T-ALL +L1,L2

6、10KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity免疫分型的價(jià)值免疫分型的價(jià)值n確定ALL的細(xì)胞類型（B細(xì)胞或T細(xì)胞）和ALL的分化階段。n鑒定AML的特征。n對(duì)形態(tài)學(xué)上未分化的急性白血病有助于鑒定細(xì)胞類型。n診斷一些少見類型的白血病。如：M6、M7、M0等。11KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversityn診斷雙表型/混合細(xì)胞型急性白血病。n鑒別診斷ALL伴有髓系抗原表達(dá)（My+）或AML伴有淋系抗原表達(dá)（Ly+）。n鑒別急性白血病與其他造血系統(tǒng)和非造血系統(tǒng)惡性腫瘤。n根據(jù)一些特殊的免疫表型特征診斷與某核型異常相關(guān)的亞型。

7、如：M3/t(15;17);M2/t(8;21);M4Eo/inv(16)等。12KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity慢性白血病免疫分型慢性白血病免疫分型v慢性粒細(xì)胞性白血病主要用于急變期的分型（同急性白血病免疫分型）。v慢性淋巴細(xì)胞性白血病除了鑒別是T還是B淋巴細(xì)胞型外，還用于與反應(yīng)性淋巴細(xì)胞增多癥的鑒別，以及與部分淋巴瘤的鑒別診斷。v一些少見的白血病如：毛細(xì)胞白血病、漿細(xì)胞白血病、惡性組織細(xì)胞性白血病等的診斷與鑒別診斷。13KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity2、再生障礙性貧血的研究AA是一組由不同發(fā)病

8、機(jī)制介導(dǎo)的骨髓造血功能障礙綜合征，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前尚未完全明了，但越來(lái)越多的臨床和實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明，免疫介導(dǎo)的造血抑制AA最常見的病理機(jī)制之一。而且，具有免疫表型異常（如：CD4/CD8倒置，CD8+、活化T細(xì)胞或TCR異常增高等）的患者，臨床表現(xiàn)相對(duì)嚴(yán)重，但免疫抑制治療相對(duì)有較好的療效。14KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity常用的淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志物淋巴細(xì)胞亞群T細(xì)胞：CD3+、TCR/CD4+(Th/Ti)CD8+(Ts/Tc)B細(xì)胞：CD19+NK細(xì)胞：CD3-CD16+CD56+15KeylabofMedicineSchoolofSuZhou

9、University淋巴細(xì)胞亞群細(xì)分：淋巴細(xì)胞亞群細(xì)分：T細(xì)胞：Ts：CD8+CD28-Tc：CD8+CD28+Th：CD4+CD29+Ti：CD4+CD45RA+B細(xì)胞：B1：CD5+CD19-B2：CD5+CD19+16KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity活化淋巴細(xì)胞亞群：活化淋巴細(xì)胞亞群：活化總T細(xì)胞：CD3+/HLADR+靜止總T細(xì)胞：CD3+/HLADR-活化CD4+細(xì)胞：CD4+/HLADR+活化CD8+細(xì)胞：CD8+/HLADR+活化誘導(dǎo)分子：CD69白細(xì)胞介素2低親和力受體：CD25CD25+/CD3+：活化T細(xì)胞CD25-/CD3+

10、：靜止T細(xì)胞17KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity根據(jù)根據(jù)T T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的不同淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的不同 CD4+:Th1:CD4+IFNr+Th2:CD4+IL4+Th0:CD4+IFNr+IL4+CD8+:Tc1:CD8+IFNr+Tc2:CD8+IL4+Tc0:CD8+IFNr+IL4+18KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversityTh1Th1細(xì)胞：細(xì)胞：介導(dǎo)細(xì)胞免疫、細(xì)胞毒性T細(xì)胞的生長(zhǎng)和活化、巨噬細(xì)胞的活化、介導(dǎo)遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)。其功能亢進(jìn)將導(dǎo)致炎癥慢性遷延，器官特異性自身免疫病，急性排異反

11、應(yīng)和接觸性皮炎等的發(fā)病和免疫病理?yè)p傷。Th2Th2細(xì)胞細(xì)胞 ：介導(dǎo)體液免疫，促進(jìn)B細(xì)胞的生長(zhǎng)、活化和分化，是IgG1和IgE類抗體的轉(zhuǎn)換因子，其功能亢進(jìn)將導(dǎo)致特異性過(guò)敏反應(yīng)，參與高IgE綜合癥和嗜酸性粒細(xì)胞增多癥。Th1/Th2Th1/Th2細(xì)胞平衡偏移多見于細(xì)胞平衡偏移多見于：感染癥、自身免疫病、過(guò)敏癥、排斥反應(yīng)、免疫缺陷、腫瘤惡化等。檢測(cè)Th1/Th2細(xì)胞平衡主要是分析疾病發(fā)生發(fā)展的狀況，為臨床調(diào)整Th1/Th2細(xì)胞平衡偏提供正確的治療依據(jù)。19KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity3、血栓與止血血小板糖蛋白血小板糖蛋白 血小板質(zhì)膜糖蛋白GPa：C

12、Dw49b GPa：CD61GPb：CD42b GP：CD36GPc：CDw49f GP：CD42aGPa：CD29 GPb：CD41GPa：CD31 血小板顆粒膜糖蛋白顆粒：CD62P(GMP140、PADGEM)顆粒：溶酶體完整膜糖蛋白 CD63 溶酶體相關(guān)膜糖蛋白-1 LAMP-1 溶酶體相關(guān)膜糖蛋白-2 LAMP-220KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity活化血小板檢測(cè)活化血小板檢測(cè) CD62P，CD63 GPb/a復(fù)合物(CD41/61)GP(CD36)PAC-1 Thrombospondin 血小板內(nèi)鈣離子21KeylabofMedici

13、neSchoolofSuZhouUniversity遺傳性血小板功能缺陷性疾病診斷遺傳性血小板功能缺陷性疾病診斷巨血小板綜合癥(BSS)GPIb-(CD42a/CD42b)缺陷或缺乏 血小板無(wú)力癥(CT)GP b/a(CD41/61)缺陷或缺乏貯存池疾病-SPD下降22KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity4、CD34的絕對(duì)計(jì)數(shù) 隨著近年來(lái)外周血造血干細(xì)胞移植病例的日益增多，外周血造血干細(xì)胞的流式定量越來(lái)越成為一個(gè)突出的話題。如何準(zhǔn)確地定量干細(xì)胞數(shù)量，什么是有效的質(zhì)量控制成了各大實(shí)驗(yàn)室的話題。1989年，歐洲人創(chuàng)建了米蘭方案，利用SS與CD34作雙參數(shù)

14、直方圖，計(jì)算CD34陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)；同年，北歐人改進(jìn)了米蘭方案，加入了對(duì)照，稱之米蘭/北歐方案。23KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity 1995年，血液病治療及移植國(guó)際聯(lián)合會(huì)(the International Society of Hematotherapy and Graft Engineering，ISHAGE)成立了干細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)(Enumeration)小組，致力于尋求一種簡(jiǎn)單、快速、靈敏的流式細(xì)胞儀檢測(cè)方法去定量外周血中的造血干細(xì)胞數(shù)量。這一方法必須是對(duì)于臨床實(shí)驗(yàn)室中不同的流式細(xì)胞儀都有效，而且在不同的移植中心具有可比性。這一方案即在96年

15、問(wèn)世的ISHAGE方案，至今為止，其他各種方案改進(jìn)均以此方案為基礎(chǔ)。24KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity5、多藥耐藥（MDR）的研究白血病治療的失敗再很大程度上是由于白血病細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生了耐藥。因此對(duì)白血病耐藥機(jī)制的研究具有重要的意義。但是耐藥的形成過(guò)程卻很多。主要有幾個(gè)方面：藥物吸收減少、細(xì)胞解毒作用增強(qiáng)、靶分子改變、DNA損傷修復(fù)能力增強(qiáng)、細(xì)胞內(nèi)藥物溢出增多、細(xì)胞凋亡的抑制等。25KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity常見的流式檢測(cè)項(xiàng)目：常見的流式檢測(cè)項(xiàng)目：v參與藥物在細(xì)胞內(nèi)外轉(zhuǎn)運(yùn)的蛋白：P-17

16、0、MRP、LRP、BCRP、MVPv參與細(xì)胞解毒的酶：ALK、GST、GSH、MSv抑制細(xì)胞凋亡的蛋白：bcl-2/bax、P53v藥物泵的功能檢測(cè)：羅丹明123（R123）或柔紅霉素26KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity6、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿(PNH)陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿(PNH)是由于造血干細(xì)胞發(fā)生體細(xì)胞突變而引起的獲得性溶血性貧血,典型病例有發(fā)作夜間血紅蛋白尿,可伴全血細(xì)胞減少.其溶血是由于紅細(xì)胞膜的獲得性缺陷,對(duì)激活補(bǔ)體異常敏感所致的一種慢性血管內(nèi)溶血。27KeylabofMedicineSchoolofSuZ

17、houUniversityv隨著流式細(xì)胞儀的逐漸推廣，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD55、CD59以能從病理上提供直接的證據(jù)而得到廣泛的應(yīng)用。正常人的紅細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞、粒細(xì)胞、血小板上CD55、CD59表達(dá)完全陽(yáng)性，而PNH患者細(xì)胞則分為三型（依據(jù)CD55、CD59缺乏或減少的程度）28KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity流式細(xì)胞術(shù)在流式細(xì)胞術(shù)在PNH診斷中須注意的事項(xiàng)診斷中須注意的事項(xiàng)：1、盡量同時(shí)檢測(cè)紅細(xì)胞和粒細(xì)胞的CD55與CD59的表達(dá)情況。因?yàn)镻NH克隆來(lái)源的紅細(xì)胞在溶血后和輸血后，紅細(xì)胞中PNH克隆細(xì)胞會(huì)減少或檢測(cè)不到，而對(duì)粒細(xì)胞則影響很小。同時(shí)檢

18、測(cè)紅細(xì)胞和粒細(xì)胞CD55和CD59可以區(qū)分小細(xì)胞低色素性貧血和PNH，小細(xì)胞低色素性貧血只有紅細(xì)胞上的CD55和CD59減少，粒細(xì)胞上CD55和CD59正常。2、在檢測(cè)紅細(xì)胞的CD55與CD59時(shí)，可以用全血標(biāo)記，但必須稀釋。而在檢測(cè)粒細(xì)胞的CD55與CD59的表達(dá)時(shí)，必須先溶血再標(biāo)記。因?yàn)榧t細(xì)胞數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于粒細(xì)胞，紅細(xì)胞的存在會(huì)與粒細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)對(duì)CD55與CD59的結(jié)合。29KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity7、多發(fā)性骨髓瘤（MM）多發(fā)性骨髓瘤是漿細(xì)胞異常增生性疾病。正 常 漿 細(xì) 胞 為 CD38+/CD45dim/-，使 用 CD38/CD45雙標(biāo)

19、記檢測(cè)外周血和骨髓標(biāo)本，可以準(zhǔn)確劃定漿細(xì)胞群。通常使用CD38和CD45，結(jié)合輕鏈檢查，對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行分析。另外，正常漿細(xì)胞的表面標(biāo)記為CD19+/CD56-，而多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞通常為CD19-/CD56+。這樣，使用流式細(xì)胞儀對(duì)外周血或骨髓標(biāo)本進(jìn)行多參數(shù)分析，并計(jì)算異常漿細(xì)胞含量，對(duì)于多發(fā)性骨髓瘤的診斷和治療評(píng)估具有重要意義。30KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity8、血液免疫性疾病1.自身免疫性溶血性貧血2.特發(fā)性血小板減少性紫癜（ITP）3.免疫性粒細(xì)胞減少癥 以上疾病一般檢測(cè)紅細(xì)胞、血小板、粒細(xì)胞相關(guān)的IgG,IgM,IgD,補(bǔ)體C3等，用以鑒別診斷和輔助臨床治療。31KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity9、血液病的其它檢查(1)細(xì)胞凋亡的檢查 Fas及FasL Apo 27 bcl-2 TUNEL Annexin Caspase(半胱氨酸蛋白酶)(2)細(xì)胞DNA分析(3)白血病殘留病灶檢查(MRD)32KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity