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1、實(shí)驗(yàn)三、蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)11、實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖煜さ鞍踪|(zhì)的沉淀反應(yīng)進(jìn)一步掌握蛋白質(zhì)的性質(zhì)22、實(shí)驗(yàn)難點(diǎn)與重點(diǎn)2.1蛋白質(zhì)沉淀的方法有哪些2.2蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)的原理33、實(shí)驗(yàn)原理蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定的因素蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定的因素:水化膜、表面電荷水化膜、表面電荷加入適當(dāng)試劑使蛋白質(zhì)分子處于等電點(diǎn)狀態(tài)或失去水加入適當(dāng)試劑使蛋白質(zhì)分子處于等電點(diǎn)狀態(tài)或失去水化層，或者與某些試劑結(jié)合成不解的鹽后，蛋白質(zhì)的化層，或者與某些試劑結(jié)合成不解的鹽后，蛋白質(zhì)的膠體溶液就不穩(wěn)定，并將產(chǎn)生沉淀。膠體溶液就不穩(wěn)定，并將產(chǎn)生沉淀。4改變蛋白質(zhì)表面的水化層及電荷的主要途徑有：改變?nèi)芤旱碾x子強(qiáng)度改變?nèi)芤旱膒H改變?nèi)芤旱慕殡姵?shù)改變?nèi)芤?/p>

2、的溫度蛋白質(zhì)沉淀可逆與不可逆的區(qū)別5能使蛋白質(zhì)沉淀的試劑有：能使蛋白質(zhì)沉淀的試劑有：高濃度中性鹽高濃度中性鹽 （NH4)2SO4NH4)2SO4、Na2SO4Na2SO4、NaClNaCl（中和蛋白質(zhì)的電荷，可逆）（中和蛋白質(zhì)的電荷，可逆）這種加入鹽使蛋白質(zhì)沉淀析出的現(xiàn)象稱為這種加入鹽使蛋白質(zhì)沉淀析出的現(xiàn)象稱為鹽析鹽析，用于蛋白質(zhì)分，用于蛋白質(zhì)分離制備離制備有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑 丙酮、乙醇丙酮、乙醇 (破壞蛋白質(zhì)水膜，用于在提取破壞蛋白質(zhì)水膜，用于在提取DNADNA等時(shí)去除蛋等時(shí)去除蛋白質(zhì)，冰浴條件沉淀蛋白質(zhì)短時(shí)間內(nèi)是可逆的，否則不可逆白質(zhì)，冰浴條件沉淀蛋白質(zhì)短時(shí)間內(nèi)是可逆的，否則不可逆)重金屬鹽

3、重金屬鹽 Hg2+Hg2+、Ag+Ag+、Pb+Pb+（與蛋白質(zhì)中帶負(fù)電荷時(shí)，形成不易溶解的鹽（與蛋白質(zhì)中帶負(fù)電荷時(shí)，形成不易溶解的鹽,或改變蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)）或改變蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)）生物堿試劑生物堿試劑沉淀：沉淀：三氯乙酸三氯乙酸，苦味酸，鎢酸等（必須在溶液，苦味酸，鎢酸等（必須在溶液pHpH大大于于pIpI時(shí)，蛋白質(zhì)帶正電荷，可以與生物堿試劑結(jié)合）時(shí)，蛋白質(zhì)帶正電荷，可以與生物堿試劑結(jié)合）加熱加熱變性沉淀：豆腐變性沉淀：豆腐等電點(diǎn)等電點(diǎn)沉淀：沉淀：GluGlu的生產(chǎn)的生產(chǎn)64、實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)步驟蛋白質(zhì)溶液蛋白質(zhì)溶液1ml1mlNaClNaCl晶體少許，溶解，晶體少許，溶解，95%95%乙醇

4、乙醇2ml2ml加入加入混勻混勻觀察沉淀產(chǎn)生觀察沉淀產(chǎn)生加加水水沉淀是否溶解？沉淀是否溶解？需要先加蛋白質(zhì)溶液，再加飽和需要先加蛋白質(zhì)溶液，再加飽和硫酸銨，否則清蛋白與球蛋硫酸銨，否則清蛋白與球蛋白會(huì)同時(shí)析出白會(huì)同時(shí)析出除去球蛋白除去球蛋白加多變成鹽析，作加多變成鹽析，作用中和電荷，用中和電荷，加速沉淀加速沉淀蛋白質(zhì)溶液蛋白質(zhì)溶液5 ml5 ml加入加入5 ml 5 ml 飽和硫酸銨溶液飽和硫酸銨溶液加入加入微微搖動(dòng)，靜置數(shù)分鐘微微搖動(dòng)，靜置數(shù)分鐘觀察沉淀產(chǎn)生為球蛋白觀察沉淀產(chǎn)生為球蛋白過(guò)過(guò)濾濾濾液中加硫酸銨粉末濾液中加硫酸銨粉末析出清蛋白，加水析出清蛋白，加水沉淀是否溶解？沉淀是否溶解？操作

5、注意點(diǎn)：操作注意點(diǎn)：如加入硫酸銨如加入硫酸銨粉沫過(guò)量，會(huì)粉沫過(guò)量，會(huì)有硫酸銨晶體有硫酸銨晶體出現(xiàn)，要與蛋出現(xiàn)，要與蛋白質(zhì)沉淀區(qū)分白質(zhì)沉淀區(qū)分開(kāi)開(kāi)來(lái)。來(lái)。7蛋白質(zhì)溶液蛋白質(zhì)溶液2 ml2 ml加入加入1%1%醋酸醋酸4-54-5滴，滴，加入加入5%5%鞣酸數(shù)滴鞣酸數(shù)滴加入加入混勻混勻沉淀？沉淀？加水加水沉淀是否溶解？沉淀是否溶解？蛋白質(zhì)溶液蛋白質(zhì)溶液2 ml2 ml加入加入1%1%醋酸醋酸4-54-5滴，滴，加入飽和苦味酸數(shù)滴加入飽和苦味酸數(shù)滴加入加入混勻混勻沉淀？沉淀？加水加水沉淀是否溶解？沉淀是否溶解？pH大于大于pIpH小于小于pI時(shí)帶時(shí)帶正電荷正電荷蛋白質(zhì)溶液蛋白質(zhì)溶液2 ml2 ml加入加入1%1%醋酸鉛，至有沉淀出現(xiàn)醋酸鉛，至有沉淀出現(xiàn)加入加入加水加水沉淀是否溶解？沉淀是否溶解？蛋白質(zhì)溶液蛋白質(zhì)溶液2 ml2 ml加入加入1%1%硫酸酮，至有沉淀出現(xiàn)硫酸酮，至有沉淀出現(xiàn)加入加入加水加水沉淀是否溶解？沉淀是否溶解？85、原始數(shù)據(jù)96、問(wèn)題6.1、蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀的主要原因是什么？何謂可逆沉淀和不可逆沉淀？蛋白質(zhì)變性一定沉淀？沉淀蛋白質(zhì)一定是變性的嗎？為什么？6.2、蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)有何用途？10