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1、ICS 11.220 e 411. 中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) NY/T 571-2002 馬腺疫診斷技術(shù) Diagnostic techniques for strangles 2002一08一27發(fā)布2002門2一01實(shí)施 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布 N v/T 571 -2002 前言 馬腺疫是馬、騾、驢的一種急性傳染病，典型癥狀為發(fā)熱、上呼吸道及咽喉鉆膜呈現(xiàn)卡他性炎癥，領(lǐng) 下淋巴結(jié)表現(xiàn)急性化膿性炎癥 農(nóng)業(yè)部(1999)規(guī)定馬腺疫為二類動物疫病，本標(biāo)準(zhǔn)采用的診斷技術(shù)系我州多年來行之有效，且為國 際公認(rèn)的方法 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄 本標(biāo)準(zhǔn)山農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出。 本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物檢疫標(biāo)

2、準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口. 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:中國人民解放軍軍需大學(xué)。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起q-人:工世若、王興龍、沈廣、雷連成。 NY/T 571一2002 馬腺疫診斷技術(shù) 1范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了馬腺疫臨床檢查及病原菌分離培養(yǎng)鑒定的技術(shù)要求， 本標(biāo)準(zhǔn)適用于馬屬動物產(chǎn)地、集散地、國境口岸、飼養(yǎng)及使用單位(含個體)馬腺疫的診斷及檢疫 2規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的 修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是 否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 GB

3、4789. 28食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)染色法、培養(yǎng)基和試劑 3臨床檢查 I飛檢查前準(zhǔn)備 檢查用主要藥械有體溫計(jì)、聽診器、保定器、膠手套、線手套,3來蘇兒、()_1%!新(MISSING)潔爾滅等.術(shù)者穿 全套工作服，戴膠手套及線手套;助手穿工作服 3.2檢查方法 由助手保定被檢馬，術(shù)者按常規(guī)方法做臨床檢查，重點(diǎn)檢查鼻腔和領(lǐng)下淋巴結(jié)。 3.3臨床特征 3.3. 1一過型腺疫 鼻腔貓膜潮紅，流出漿液性或茹液性鼻液，領(lǐng)下淋巴結(jié)輕度腫脹。 3.3.2典型腺疫 體溫39 C-41 C .鼻腔流出翁性至膿性鼻液，領(lǐng)下淋巴結(jié)腫大，表面凹凸不平，觸之硬實(shí)，界限清 楚，如雞蛋大甚至拳頭大，周圍發(fā)生炎癥時，腫脹加劇

4、，充滿于整個下領(lǐng)間隙，界限不清，熱痛明顯，以后 隨著炎癥的發(fā)展，局部組織腫脹化膿，腫脹完全成熟，自行破潰，流出大量黃白色茹稠膿汁，體溫恢復(fù)正 常，隨后，創(chuàng)內(nèi)肉芽組織新生，逐漸愈合。病程約2周一3周。 3. 3. 3惡性型腺痊 如果病馬抵抗力很弱，則馬腺疫鏈球菌可由領(lǐng)下淋巴結(jié)的化膿灶轉(zhuǎn)移到其他淋巴結(jié)，形成化膿灶， 甚至轉(zhuǎn)移至肺和腦等器官，發(fā)生膿腫，體溫多稽留不降，常因極度衰弱或繼發(fā)膿毒敗血癥死亡 3.3.4臨床診斷結(jié)果 根據(jù)3. 3. 1-3. 3. 3項(xiàng)描述的臨床癥狀，初步確定患馬是否發(fā)生了馬腺疫及其型別。 4細(xì)菌學(xué)檢查 4.1器材 恒溫箱、高壓蒸汽滅菌器、顯微鏡、試管架、滅菌小試管,5 ml

5、滅菌注射器、煮沸消毒器、外科剪、棉 棒、鑷子、載玻片、鉑金耳、酒精燈等 4.2培養(yǎng)基及實(shí)驗(yàn)動物 4.2. 1培養(yǎng)基:10%!血(MISSING)清肉湯,5%血清瓊脂平板、5%!綿(MISSING)羊血液瓊脂平板及美藍(lán)牛乳培養(yǎng)基，Re NY/T 571 -2002 制方法見附錄A(規(guī)范性附錄)。 4.2.2昆明系小鼠.體重17g-20g,清潔級。 4. 3病料標(biāo)本采集 病馬領(lǐng)下淋巴結(jié)未破潰膿腫以碘酒及酒精消毒后，用注射器吸取膿汁泣人火菌小試管中;已破潰的 膿腫，以滅菌生理鹽水浸濕的棉棒蘸取膿汁或鼻腔分泌液放于滅菌小試管I,立即檢查，或放4C冰箱 中保存待檢。 4.4直接鏡檢 4.4.飛操作方法

6、將病料標(biāo)本涂于載玻片L、于燥、固定按GB 4789. 28- .1994中2z條規(guī)定進(jìn)行革蘭氏染色。 4.4. 2結(jié)果觀察 馬腺疫鏈球菌的形態(tài)及染色特征是:在膿球間散布著山幾個甚至_白個球菌組成的波浪狀彎曲的 長鏈條，各菌大小不等，多呈扁球狀，直徑約1方法用鉑耳采集病料，接種10%!血(MISSING)清肉湯（見a.1章）進(jìn)行富集培養(yǎng)，接種5-10%!血(MISSING)清瓊脂平板（見a.2章）和5%!羊(MISSING)血瓊脂平板（見a.3章）進(jìn)行分離培養(yǎng)，結(jié)果觀察結(jié)果如下，符合馬鏈球菌的培養(yǎng)特性。A） 10環(huán)血清肉湯：培養(yǎng)后。48小時后，長鏈狀細(xì)菌纏繞并以棉絮的形式沉淀在試管底部。72小時

7、后，上清液清澈透明。5,00-10%!血(MISSING)清瓊脂：形成圓形、透明、有光澤、中央微隆起、表面光滑的露珠狀菌落。強(qiáng)毒株的菌落表面通常為顆粒狀結(jié)構(gòu)，用放大鏡觀察更為明顯。c） 5%!羊(MISSING)血瓊脂：每月發(fā)生溶血，即在小露珠樣菌落周圍形成一條界限清晰、完全透明的溶血帶，其寬度可達(dá)2mm-3mm以上。4.6生化特性4.6.1操作方法：將可疑菌落接種于GB 4789.28-1994中3.2規(guī)定的飲糖管和bt789.28-1994中3.9和g134789.28-1994中3.17規(guī)定的生化培養(yǎng)基中，37孵育72h 4.6.2結(jié)果24h后觀察結(jié)果，48h和72h，結(jié)果符合以下特征。

8、)糖發(fā)酵試驗(yàn)：發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、甘露糖、單糖、木糖等，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣：不發(fā)酵糖、山梨醇、甘露醇、乳糖。b） 生化試驗(yàn)：馬尿酸鈉不分解，硝酸鹽不還原，亞甲基藍(lán)乳不還原（見a.4章），不溶于膽汁4。小鼠感染試驗(yàn)4.7.1操作方法：用滅菌柱吸取10%!血(MISSING)清肉湯0.1ml、-0.2ml或用滅菌I、h稀釋至7。磷酸鹽緩沖液（尿）：2-3膿腫。3只小鼠皮下注射1.3m.5M工人（見4.2.2）3天，4.7.2觀察結(jié)果1）竇夷膽汁加10%!血(MISSING)清肉湯n h培養(yǎng)1.8.1，人金針菇試管內(nèi)混勻，置37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15分鐘。培養(yǎng)物仍渾濁，說明供試菌未被膽汁溶解，否則培養(yǎng)物透明

9、，NY/T 571-2002小鼠在24小時3小時出現(xiàn)敗血癥或死于敗血癥，腹腔液、心血、血液中檢出馬鏈球菌，確認(rèn)馬鏈球菌為強(qiáng)毒馬鏈球菌，尸檢時肝臟和脾臟。4.8細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果根據(jù)4.4-4.7的檢查結(jié)果，確定樣品中是否有強(qiáng)毒馬鏈球菌。馬駒體溫升高（39c-41c）。領(lǐng)子下面的淋巴結(jié)腫大了。隨著炎癥的發(fā)展，腫脹的淋巴結(jié)化膿并潰爛。取膿?？稍\斷為馬傳染性貧血。6.1馬傳染性貧血是一種惡性動物疾病。它的體溫以持續(xù)發(fā)熱為特征，貧血和黃疸馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬

10、傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血：馬傳染性貧血貧血：。6.2馬氏壞疽的淋巴結(jié)腫大、堅(jiān)實(shí)。它沒有熱痛，沒有化膿，經(jīng)常不能移動。此外，有特征性的壞疽結(jié)節(jié)和潰瘍，或在壞疽情況下有放射狀疤痕，蒽醌的眼斑試驗(yàn)呈陽性。NY/P 571-2002附錄A（規(guī)范性附錄）培養(yǎng)基的制備A.1 A.2 10%!血(MISSING)清肉湯成分：100mL正常營養(yǎng)肉湯，10mL健康馬（兔）血清制備方法：將血清無菌加入含正常營養(yǎng)肉湯的培養(yǎng)基管中，混勻。健康馬（兔

11、）血清的制備：普通瓊脂100ml5ml，加熱至-10ml，冷至53左右，無菌加入人血清，貼好，倒入平板中，制成平板。A.3 A.q 5%!羊(MISSING)血瓊脂平板組成：普通營養(yǎng)瓊脂除顫羊（馬、兔）血制備方法：將普通瓊脂加熱融化100毫升蝸牛-冷卻至約53，無菌加入血液，混勻，倒入平板，制成平板。亞甲藍(lán)乳的介質(zhì)組成：脫脂乳100ml，1%!亞(MISSING)甲藍(lán)水溶液5ml，配制：脫脂乳中加入1%!亞(MISSING)甲藍(lán)水溶液，混勻，分裝于小試管中，用55kPa高壓蒸汽滅菌20min，加熱融化100毫升snil-冷卻至約53攝氏度，無菌加入血液，攪拌均勻，倒入盤中，制成盤中。亞甲藍(lán)乳的介質(zhì)組成：脫脂乳100ml，1%!亞(MISSING)甲藍(lán)水溶液5ml，配制：脫脂乳中加入1%!亞(MISSING)甲藍(lán)水溶液，混勻，分裝于小試管中，用55kPa高壓蒸汽滅菌20min，