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1、,最常用的質(zhì)粒是大腸桿菌的質(zhì)粒， 其中常含有抗藥基因，如四環(huán)素的 標(biāo)記基因。質(zhì)粒的存在與否對宿主 細(xì)胞生存沒有決定性作用，但復(fù)制 只能在宿主細(xì)胞內(nèi)成。,質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨 立于細(xì)菌染色體（即擬核DNA）之外， 并且具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀 DNA分子。,質(zhì)粒是基因工程最常用的運載體。,當(dāng)限制酶從識別序列的中心軸線處切開時，產(chǎn)生的是平末端。,當(dāng)限制酶從識別序列的中心軸線兩側(cè)切開時，產(chǎn)生的是黏性末端。,四、基因工程基本操作的四個步驟,1、目的基因的獲取,2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建,3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,4、目的基因的檢測與鑒定,目的基因的獲取,1、目的基因主要是指_,編碼蛋白質(zhì)的結(jié)

2、構(gòu)基因，是人們所需要轉(zhuǎn)移或改造的基因。 如蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因，還有植物的抗?。共《?、抗細(xì)菌）基因、種子貯藏蛋白的基因，以及人的胰島素基因、干擾素基因等。,2、獲取目的基因的常用方法有哪些?,（1）從基因文庫中獲取,（2）利用PCR技術(shù)擴增,（3）人工合成,請閱讀P9第一和二兩段,（一）從基因文庫中獲取目的基因,將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫,基因文庫, 概念：PCR全稱為_，是一項 在生物_復(fù)制_的核酸合成技術(shù),條件：_、 _、_ 、 _.,原理：_,方式：以_方式擴增，即_（n為擴增循 環(huán)的次數(shù)）,結(jié)果

3、：,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),體外,特定DNA片段,DNA復(fù)制,已知基因的核苷酸序列,四種脫氧核苷酸,一對引物,DNA聚合酶,指數(shù),2n,使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地擴增,(二)利用PCR技術(shù)擴增目的基因,過程,高溫變性（解旋為單鏈）,低溫退火（引物與單鏈互補結(jié)合）,適溫延伸（在Taq酶的作用下合成 與模板互補的DNA雙鏈）,重復(fù)循環(huán),思考：PCR技術(shù)與DNA復(fù)制有何異同？,對DNA連接酶、DNA聚合酶等的理解,連接兩個DNA片段,基因工程,切割某種特定的脫氧核苷酸序列,基因工程,將眾多游離的脫氧核苷酸聚合成脫氧核苷酸長鏈,DNA復(fù)制 逆轉(zhuǎn)錄,轉(zhuǎn)錄 RNA復(fù)制,DNA復(fù)制 轉(zhuǎn)錄,使堿基間氫鍵斷裂

4、形成脫氧核苷酸鏈,將眾多游離的核糖核苷酸聚合成核糖核苷酸長鏈,8.（2010廣州模擬）下圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，圖中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是（ ）,A. B. C. D.,C,基因組文庫與部分基因文庫的關(guān)系,怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因呢?,基因文庫的構(gòu)建方法,鳥槍法：,供體細(xì)胞中的DNA,許多DNA片段,運載體,限制酶,與載體連接 載入,受體細(xì)胞,產(chǎn)生特定性狀,導(dǎo)入,外源DNA擴增,目的基因,分離,(直接分離法),反轉(zhuǎn)錄法： 以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從

5、而獲得所需的基因。,目的基因的mRNA,單鏈DNA,反轉(zhuǎn)錄酶,DNA聚合酶,雙鏈DNA (目的基因),根據(jù)已知的氨基酸序列合成DNA法 ：,根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測出相應(yīng)的信使RNA序列，然后按照堿基互補配對原則，推測出它的結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，再通過化學(xué)方法，以單核苷酸為原料合成目的基因。,蛋白質(zhì)的氨基酸序列,mRNA的核苷酸序列,結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列,推測,推測,目的基因,化學(xué)合成,上述三種目的基因提取的方法有何優(yōu)缺點？,操作簡便廣泛使用,工作量大，盲目，分離出來的有時并非一個基因,專一性強,操作過程麻煩，mRNA很不穩(wěn)定，要求的技術(shù)條件較高,專一性最強,僅限于合成核苷酸對較少的簡單基因,