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1、動物細胞工程第四章第二節(jié)細胞培養(yǎng)液4.2.1 細胞培養(yǎng)的常用液體高純化水：蒸餾水（密封，短儲）離子交換水（含有有機物）膠原酶溶液膠原酶溶液C6H14N2O2一般配制為100倍濃縮液，配制時應(yīng)加溫至30，完全溶解后過濾除菌，分裝至小瓶，儲存于-20。(1)199培養(yǎng)基：1950年為培養(yǎng)雞胚細胞研制的。RPMl 1640其組成較為簡單，但可以適應(yīng)很多種類細胞的生長。RPMl 1640其組成較為簡單，但可以適應(yīng)很多種類細胞的生長。離子交換水（含有有機物）谷氨酰胺在溶液中不穩(wěn)定，4放置7天可分解50%，兩周以上要重新加入原來量的谷氨酰胺。DMEM(A)細胞培養(yǎng)基（粉末型）成份谷氨酰胺在細胞代謝過程中起

2、重要作用，合成培養(yǎng)基中都要添加。(1)199培養(yǎng)基：1950年為培養(yǎng)雞胚細胞研制的。血清的不同批號含有不同的成分，所以許多人發(fā)現(xiàn)，應(yīng)該在使用前對血清進行測試。：HamF12+DMEM=1:1；谷氨酰胺在溶液中不穩(wěn)定，4放置7天可分解50%，兩周以上要重新加入原來量的谷氨酰胺。大多數(shù)試劑商提供樣品，所滿意的批號即可選用，這樣可以一次得到足夠一年用量的血清，血清在使用前通常在56加熱30分鐘，這一過程稱為滅活。馬血清、雞血清、兔血清、羊血清、人血清等大多數(shù)試劑商提供樣品，所滿意的批號即可選用，這樣可以一次得到足夠一年用量的血清，血清在使用前通常在56加熱30分鐘，這一過程稱為滅活。（L-精氨酸、胱

3、氨酸、組氨酸、絡(luò)氨酸）7.谷氨酰氨培養(yǎng)液 谷氨酰胺在細胞代謝過程中起重要作用，合成培養(yǎng)基中都要添加。一般配制為100倍濃縮液，配制時應(yīng)加溫至30，完全溶解后過濾除菌，分裝至小瓶，儲存于-20。使用時，在每100 ml培養(yǎng)液中加入052 ml谷氨酰胺母液，終濃度為14 mmol/L。谷氨酰胺在溶液中不穩(wěn)定，4放置7天可分解50%，兩周以上要重新加入原來量的谷氨酰胺。1.培養(yǎng)基的基本要求4.2.2 培養(yǎng)基（L-精氨酸、胱氨酸、組氨酸、絡(luò)氨酸），濃度：5-20%，常用10%。血清來源：血清來源：牛血清（胎牛血清（胎牛血清、新牛血清、新生牛血清、生牛血清、小牛血清）小牛血清）馬血清、雞馬血清、雞血清、

4、兔血血清、兔血清、羊血清、清、羊血清、人血清等人血清等 血清的不同批號含有不同的成分，所以許多人發(fā)現(xiàn)，應(yīng)該在使用前對血清進行測試血清進行測試。大多數(shù)試劑商提供樣品，所滿意的批號即可選用，這樣可以一次得到足夠一年用量的血清，血清在使用前通常在56加熱30分鐘，這一過程稱為滅活。滅活。常用的合成培養(yǎng)基(液)(1)199培養(yǎng)基：1950年為培養(yǎng)雞胚細胞研制的。199培養(yǎng)基含有多達69種成分。其組成成分雖然很多，但單獨使用時只能維持細胞存活數(shù)天，在加入血清后可以維持很多種細胞的生長。序號化合物名稱含量(mg/L)序號化合物名稱含量(mg/L)1無水氯化鈣185.0031維生素 D 20.0102硝酸鐵

5、.9H 2 O0.7232氯化膽堿0.5003氯化鉀400.0033葉酸0.0104無水硫酸鎂97.6734肌醇0.0505乙酸鈉50.0035維生素 K0.0166氯化鈉6800.0036煙酰胺0.0257無水磷酸二氫鈉122.0037煙酸0.0258L-丙氨酸50.0038對氨基苯甲酸0.0509L-鹽酸精氨酸70.0039泛酸鈣0.01010L-門冬氨酸60.0040鹽酸吡哆醇0.02511L-鹽酸半胱氨酸0.1141鹽酸吡哆醛0.02512L-鹽酸胱氨酸26.0042維生素 A醋酸鹽0.10013DL-谷氨酸133.6043核黃素0.10014L-谷氨酰胺100.0044鹽酸硫胺0.0

6、1015甘氨酸50.0045D 2-磷酸生育酚鈉鹽0.01016L-鹽酸組氨酸21.8846硫酸腺嘌呤10.0017L-羥脯氨酸10.0047腺嘌呤三磷酸1.0018DL-異亮氨酸40.0048腺嘌呤一磷酸0.238519DL-亮氨酸120.0049膽固醇0.20020L-鹽酸賴氨酸70.0050脫氧核糖0.50021DL-甲硫氨酸30.0051葡萄糖100022DL-苯丙氨酸50.0052還原谷胱甘肽0.05023L-脯氨酸40.0053鹽酸鳥嘌呤0.30024DL-絲氨酸50.0054次黃嘌呤0.30025DL-蘇氨酸60.0055吐溫 805.0026DL-色氨酸20.0056核糖0.5

7、0027L-酪氨酸.鈉鹽57.6657胸腺嘧啶0.30028DL-纈氨酸50.0058尿嘧啶0.30029維生素 C0.056659黃嘌呤鈉鹽0.30030D-生物素0.01060酚紅20.00序號化合物名稱含量(mg/L)序號化合物名稱含量(mg/L)1無水氯化鈣.2H 2 O265.0018L-絲氨酸42.002硝酸鐵.9H 2 O0.1019L-蘇氨酸95.003氯化鉀400.0020L-色氨酸16.004無水硫酸鎂97.6721L-酪氨酸72.005氯化鈉6400.0022L-纈氨酸94.006無水磷酸二氫鈉109.0023D-泛酸鈣4.007丁二酸75.0024酒石酸膽堿7.208丁

8、二酸鈉100.0025葉酸4.009L-鹽酸精氨酸84.0026肌醇7.2010L-鹽酸胱氨酸63.0027煙酰胺4.0011甘氨酸30.0028核黃素0.4012L-鹽酸組氨酸42.0029鹽酸硫胺4.0013L-異亮氨酸105.0030鹽酸吡哆辛4.0014L-亮氨酸105.0031葡萄糖1000.0015L-鹽酸賴氨酸146.0032丙酮酸鈉110.0016L-甲硫氨酸30.0033酚紅9.30.0017L-苯丙氨酸66.00DMEM(A)細胞培養(yǎng)基（粉末型）成份 (3)RPMl 1640培養(yǎng)基：最初為培養(yǎng)小鼠白血病細胞的需要而制備。RPMl 1640其組成較為簡單，但可以適應(yīng)很多種類細胞的生長。不僅腫瘤細胞，而且很多正常組織細胞可用RPMI 1640進行體外培養(yǎng)。：HamF12+DMEM=1:1；補加HEPES+NaHCO3謝謝觀看謝謝觀看