食品微生物檢驗方法食品微生物檢驗方法內(nèi)容提要內(nèi)容提要菌落總數(shù)檢測菌落總數(shù)檢測大腸菌群及大腸桿菌檢測大腸菌群及大腸桿菌檢測金黃色葡萄球菌檢測金黃色葡萄球菌檢測沙門氏菌檢測沙門氏菌檢測單核細胞增生李斯特氏菌單核細胞增生李斯特氏菌檢測檢測菌落總數(shù)測定菌落總數(shù)測定菌落總數(shù)的概念菌落總數(shù)的概念菌落總數(shù)是指在被檢樣品的單位重量（菌落總數(shù)是指在被檢樣品的單位重量（g g）、容積（）、容積（mlml）或表面積（或表面積（cmcm2 2）內(nèi)，所含能于某種固體培養(yǎng)基上，在一）內(nèi)，所含能于某種固體培養(yǎng)基上，在一定條件下培養(yǎng)后所生成的菌落的總數(shù)。定條件下培養(yǎng)后所生成的菌落的總數(shù)。菌落總數(shù)測定菌落總數(shù)測定衛(wèi)生學意義衛(wèi)生學意義判定食品被細菌污染的程度及判定食品被細菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量。衛(wèi)生質(zhì)量。及時反映食品加工過程是否符及時反映食品加工過程是否符合合 衛(wèi)生要求，為被檢食品衛(wèi)生衛(wèi)生要求，為被檢食品衛(wèi)生學評學評 價提供依據(jù)。價提供依據(jù)。通常認為，食品中細菌數(shù)量越通常認為，食品中細菌數(shù)量越多，多，則可考慮致病菌污染的可能則可考慮致病菌污染的可能性越性越 大，菌落總數(shù)的多少在一定大，菌落總數(shù)的多少在一定程度程度 上標志著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)上標志著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣。劣。FDA BAM FDA BAM 菌落總數(shù)測定流程菌落總數(shù)測定流程 檢樣檢樣xg/mL+9xmlxg/mL+9xml稀釋液（磷酸鹽緩沖液）稀釋液（磷酸鹽緩沖液）適適當十倍稀釋樣品當十倍稀釋樣品選擇選擇2323個連續(xù)適宜稀釋度個連續(xù)適宜稀釋度各取各取1mL1mL分別加入滅菌平皿內(nèi)分別加入滅菌平皿內(nèi)（每個稀釋度做兩個平行）（每個稀釋度做兩個平行）每皿內(nèi)加入適量平板計數(shù)瓊脂（每皿內(nèi)加入適量平板計數(shù)瓊脂（PCAPCA）35 35 ，48 48 2h 2h菌落計數(shù)菌落計數(shù) FDA BAM FDA BAM 菌落計數(shù)方法菌落計數(shù)方法選擇選擇25250CFU25250CFU之間的菌落進行計數(shù)，計算公式如下：之間的菌落進行計數(shù)，計算公式如下：N=C/N=C/（1*n1*n1 1+0.1*n+0.1*n2 2）*d*d所有平板的菌落數(shù)都不足所有平板的菌落數(shù)都不足25CFU25CFU，報告，報告EAPC/mlEAPC/ml（g g）為）為25*1/d25*1/d。EAPC EAPC：estimated aerobic plate countestimated aerobic plate count所有平板的菌落數(shù)都超過所有平板的菌落數(shù)都超過250CFU250CFU，但不足，但不足100/cm100/cm2 2 ，報告，報告EAPC/mlEAPC/ml（g g）為最接近）為最接近250CFU250CFU的平板菌落數(shù)的估計值，乘以的平板菌落數(shù)的估計值，乘以相應的稀釋度。相應的稀釋度。所有平板的菌落數(shù)都超過所有平板的菌落數(shù)都超過100/cm100/cm2 2 ，計算平板的面積（直徑，計算平板的面積（直徑為為90mm90mm的平板面積為的平板面積為65cm65cm2 2），估計最高稀釋度每），估計最高稀釋度每cmcm2 2的菌落的菌落數(shù)，乘以相應平板面積作為該稀釋度的菌落計數(shù)結(jié)果，報告數(shù)，乘以相應平板面積作為該稀釋度的菌落計數(shù)結(jié)果，報告EAPC/mlEAPC/ml（g g）為）為65*100*1/d65*100*1/d。無法計數(shù)的平板報告無法計數(shù)的平板報告LALA（Laboratory AccidentLaboratory Accident）。）。最終結(jié)果保留前兩位有效數(shù)字。按照最終結(jié)果保留前兩位有效數(shù)字。按照4 4舍舍6 6入，入，5 5是奇進偶不是奇進偶不進。進。ISO4833-2003 ISO4833-2003 菌落總數(shù)測定流程菌落總數(shù)測定流程 檢檢樣樣xg/mL+9xmlxg/mL+9xml稀釋液（磷酸鹽緩沖液）稀釋液（磷酸鹽緩沖液）適當十倍稀釋樣品適當十倍稀釋樣品選擇選擇2323個連續(xù)適宜稀釋度個連續(xù)適宜稀釋度各取各取1mL1mL分別加入滅菌平皿內(nèi)分別加入滅菌平皿內(nèi)（每個稀釋度做兩個平行）（每個稀釋度做兩個平行）每皿內(nèi)加入適量（每皿內(nèi)加入適量（1215mL1215mL）平板計數(shù)瓊脂（平板計數(shù)瓊脂（PCAPCA），），30301 1 ，72 72 3 h3 h菌落計數(shù)菌落計數(shù) 如果懷疑樣品中含如果懷疑樣品中含有在培養(yǎng)基表面蔓有在培養(yǎng)基表面蔓延生長的菌落，待延生長的菌落，待瓊脂凝固后，在其瓊脂凝固后，在其上覆蓋一層（上覆蓋一層（4mL4mL）水瓊脂。水瓊脂。平板疊放平板疊放不超過不超過6 6個個ISO4833-2003ISO4833-2003菌落計數(shù)方法菌落計數(shù)方法選擇連續(xù)選擇連續(xù)2 2個稀釋度不超過個稀釋度不超過300CFU300CFU的平板，且一個平板至少的平板，且一個平板至少含含15CFU15CFU進行計數(shù)，計算公式如下：進行計數(shù)，計算公式如下：N=C/N=C/（n n1 1+0.1*n+0.1*n2 2）*d*d所有平板的菌落數(shù)都不足所有平板的菌落數(shù)都不足15CFU15CFU，計算，計算2 2平板菌落的算術(shù)平均平板菌落的算術(shù)平均值值m m，液體樣品：，液體樣品：N NE E=m=m 固體樣品：固體樣品：N NE E=m=md d-1-1無菌生長：液體樣品：無菌生長：液體樣品：less than 1;less than 1;固體樣品：固體樣品：less less than 1 than 1 d d-1-1最終結(jié)果保留前兩位有效數(shù)字。最終結(jié)果保留前兩位有效數(shù)字。菌落總數(shù)測定幾點說明菌落總數(shù)測定幾點說明由于檢樣中采用由于檢樣中采用30/3530/35有氧條件下培養(yǎng)，因而并不是樣有氧條件下培養(yǎng)，因而并不是樣品中實際的總活菌數(shù)，一些特殊營養(yǎng)要求的細菌、厭氧菌、品中實際的總活菌數(shù)，一些特殊營養(yǎng)要求的細菌、厭氧菌、微需氧菌、以及非嗜中溫細菌，均難以反映出來。微需氧菌、以及非嗜中溫細菌，均難以反映出來。鑒于食品檢樣中的細菌細胞是以單個、成雙、鏈狀、葡萄鑒于食品檢樣中的細菌細胞是以單個、成雙、鏈狀、葡萄狀或成堆的形式存在，因而在平板上出現(xiàn)的菌落可以來源狀或成堆的形式存在，因而在平板上出現(xiàn)的菌落可以來源于細胞塊，也可以來源于單個細胞，因而平板上所得菌落于細胞塊，也可以來源于單個細胞，因而平板上所得菌落的數(shù)字不應報告活菌數(shù)，而應以單位重量、容積或表面積的數(shù)字不應報告活菌數(shù)，而應以單位重量、容積或表面積內(nèi)的菌落數(shù)或菌落形成單位（內(nèi)的菌落數(shù)或菌落形成單位（colony forming unitscolony forming units，CFUCFU）報告。）報告。菌落總數(shù)測定幾點要求菌落總數(shù)測定幾點要求每個樣品從開始稀釋到傾注最后一個平皿所用的時間不得每個樣品從開始稀釋到傾注最后一個平皿所用的時間不得超過超過15min15min，主要為防止細菌增殖和產(chǎn)生片狀菌落。樣液，主要為防止細菌增殖和產(chǎn)生片狀菌落。樣液與瓊脂應充分混合，避免將混合物濺到平皿壁和皿蓋上。與瓊脂應充分混合，避免將混合物濺到平皿壁和皿蓋上。皿內(nèi)瓊脂凝固后，不要長時間放置，然后倒置培養(yǎng)，可避皿內(nèi)瓊脂凝固后，不要長時間放置，然后倒置培養(yǎng)，可避免菌落蔓延生長。免菌落蔓延生長。檢樣過程中應用稀釋劑做空白對照，用以判定稀釋液、培檢樣過程中應用稀釋劑做空白對照，用以判定稀釋液、培養(yǎng)基、平皿或吸管可能存在的污染。同時，檢樣過程中應養(yǎng)基、平皿或吸管可能存在的污染。同時，檢樣過程中應在工作臺上打開一塊空白平板計數(shù)瓊脂，其暴露時間應與在工作臺上打開一塊空白平板計數(shù)瓊脂，其暴露時間應與檢樣時間相當，以了解檢樣在檢驗操作過程中有無受到來檢樣時間相當，以了解檢樣在檢驗操作過程中有無受到來自空氣的污染。自空氣的污染。檢樣稀釋液有時帶有食品顆粒，為避免與細菌菌落發(fā)生混檢樣稀釋液有時帶有食品顆粒，為避免與細菌菌落發(fā)生混淆，可作一檢樣稀釋液與平板計數(shù)瓊脂混合的平皿，不經(jīng)淆，可作一檢樣稀釋液與平板計數(shù)瓊脂混合的平皿，不經(jīng)培養(yǎng)，于培養(yǎng)，于4 4 放置，以便在計數(shù)檢樣時用作對照。放置，以便在計數(shù)檢樣時用作對照。大腸菌群的定義大腸菌群的定義大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。大腸菌群不是細菌學上的分類命名，而是根據(jù)衛(wèi)生學方面大腸菌群不是細菌學上的分類命名，而是根據(jù)衛(wèi)生學方面的要求，提出的與糞便污染有關(guān)的細菌，即作為食品、水的要求，提出的與糞便污染有關(guān)的細菌，即作為食品、水體等是否受過人畜糞便污染的指示菌，這些細菌在生化及體等是否受過人畜糞便污染的指示菌，這些細菌在生化及血清學方面并非完全一致。根據(jù)進一步的生化試驗，可將血清學方面并非完全一致。根據(jù)進一步的生化試驗，可將這群細菌再分為大腸艾希氏菌（俗稱大腸桿菌）、弗氏檸這群細菌再分為大腸艾希氏菌（俗稱大腸桿菌）、弗氏檸檬酸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和陰溝腸桿菌等。檬酸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和陰溝腸桿菌等。大腸桿菌的定義大腸桿菌的定義大腸桿菌（也稱大腸埃希氏菌），分類于腸桿菌科，歸屬大腸桿菌（也稱大腸埃希氏菌），分類于腸桿菌科，歸屬于埃希氏菌屬。于埃希氏菌屬。大腸桿菌指革蘭氏陰性無芽孢桿菌、乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣、大腸桿菌指革蘭氏陰性無芽孢桿菌、乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣、IMViCIMViC試驗（靛基質(zhì)、試驗（靛基質(zhì)、MRMR、V-PV-P、檸檬酸鹽試驗）為、檸檬酸鹽試驗）為+-+-或或-+-+-的細菌。的細菌。與人類有關(guān)的大腸桿菌統(tǒng)稱為致瀉性大腸桿菌，包括五種：與人類有關(guān)的大腸桿菌統(tǒng)稱為致瀉性大腸桿菌，包括五種：腸毒素性大腸桿菌（腸毒素性大腸桿菌（ETECETEC）、致病性大腸桿菌（）、致病性大腸桿菌（EPECEPEC）、）、出血性大腸桿菌（出血性大腸桿菌（EHECEHEC）、侵襲性大腸桿菌（）、侵襲性大腸桿菌（EIECEIEC）、黏）、黏附性大腸桿菌（附性大腸桿菌（EAECEAEC）。）。大腸菌群和大腸桿菌的關(guān)系大腸菌群和大腸桿菌的關(guān)系耐熱大腸菌群的定義：能在液體乳糖培養(yǎng)基中耐熱大腸菌群的定義：能在液體乳糖培養(yǎng)基中耐熱大腸菌群的定義：能在液體乳糖培養(yǎng)基中耐熱大腸菌群的定義：能在液體乳糖培養(yǎng)基中35/37 35/37 35/37 35/37 培養(yǎng)培養(yǎng)培養(yǎng)培養(yǎng)48h48h48h48h產(chǎn)酸產(chǎn)氣，并在產(chǎn)酸產(chǎn)氣，并在產(chǎn)酸產(chǎn)氣，并在產(chǎn)酸產(chǎn)氣，并在44.544.544.544.5培養(yǎng)培養(yǎng)培養(yǎng)培養(yǎng)24h24h24h24h產(chǎn)酸產(chǎn)氣的細菌產(chǎn)酸產(chǎn)氣的細菌產(chǎn)酸產(chǎn)氣的細菌產(chǎn)酸產(chǎn)氣的細菌（依據(jù)（依據(jù)（依據(jù)（依據(jù)ISOISOISOISO標準）標準）標準）標準）衛(wèi)生學意義衛(wèi)生學意義大腸菌群和大腸桿菌是評價衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標，作為食大腸菌群和大腸桿菌是評價衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標，作為食品中的糞便污染指標。品中的糞便污染指標。食品中檢出大腸菌群，表明該食品有糞便污染，既可能有食品中檢出大腸菌群，表明該食品有糞便污染，既可能有腸道致病菌存在，因而也就有可能通過污染的食品引起腸腸道致病菌存在，因而也就有可能通過污染的食品引起腸道傳染病的流行。大腸菌群數(shù)的高低，表明了糞便污染的道傳染病的流行。大腸菌群數(shù)的高低，表明了糞便污染的程度，也反映了對人體健康危害性的大小。程度，也反映了對人體健康危害性的大小。大腸桿菌在外界存活時間與一些主要腸道致病菌接近，它大腸桿菌在外界存活時間與一些主要腸道致病菌接近，它的出現(xiàn)預示著某些腸道病原菌的存在，因此該菌是國際上的出現(xiàn)預示著某些腸道病原菌的存在，因此該菌是國際上公認的衛(wèi)生監(jiān)測指示菌。近年來，有些國家在執(zhí)行公認的衛(wèi)生監(jiān)測指示菌。近年來，有些國家在執(zhí)行HACCPHACCP管管理中，將大腸桿菌檢測作為微生物污染狀況的監(jiān)測指標和理中，將大腸桿菌檢測作為微生物污染狀況的監(jiān)測指標和HACCPHACCP實施效果的評估指標。實施效果的評估指標。大腸桿菌的生物學特性大腸桿菌的生物學特性基本形態(tài)：基本形態(tài)：此菌為兩端鈍圓的短小桿菌，一此菌為兩端鈍圓的短小桿菌，一般約般約0.5-0.8m*1.0-3.0 m0.5-0.8m*1.0-3.0 m，多，多單獨存在或成雙，但不呈長鏈排列。單獨存在或成雙，但不呈長鏈排列。約約50%50%的菌株有周生鞭毛，但多數(shù)只的菌株有周生鞭毛，但多數(shù)只有有1-41-4根，一般不超過根，一般不超過1010根，故菌體根，故菌體動力弱。多數(shù)菌株有菌毛，有的有動力弱。多數(shù)菌株有菌毛，有的有莢膜或微莢膜，不形成芽孢，對普莢膜或微莢膜，不形成芽孢，對普通堿性染料著色良好，革蘭氏染色通堿性染料著色良好，革蘭氏染色陰性。陰性。大腸桿菌的生物學特性大腸桿菌的生物學特性培養(yǎng)特性：培養(yǎng)特性：大腸桿菌合成代謝能力強，在含無機鹽、銨鹽、葡萄糖的大腸桿菌合成代謝能力強，在含無機鹽、銨鹽、葡萄糖的普通培養(yǎng)基上生長良好。最適生長溫度為普通培養(yǎng)基上生長良好。最適生長溫度為3737，在，在42-44 42-44 條件下仍能生長，生長溫度范圍條件下仍能生長，生長溫度范圍15-46 15-46。l 在普通營養(yǎng)瓊脂上有在普通營養(yǎng)瓊脂上有3 3中菌落形態(tài)：中菌落形態(tài)：1 1）光滑型：菌落邊緣整齊，表面有）光滑型：菌落邊緣整齊，表面有光澤、濕潤、光澤、濕潤、光滑、呈灰色，在生理鹽水中易分散；光滑、呈灰色，在生理鹽水中易分散；2 2）粗糙型：菌落扁平、干澀、邊緣）粗糙型：菌落扁平、干澀、邊緣不整齊，易不整齊，易 在生理鹽水中自凝；在生理鹽水中自凝；3 3）黏液型：常為含有莢膜的菌株。）黏液型：常為含有莢膜的菌株。大腸菌群及大腸桿菌測定大腸菌群及大腸桿菌測定 MPNMPN法檢驗流程法檢驗流程（FDA BAMFDA BAM）檢樣檢樣50g+450ml50g+450ml稀釋液稀釋液 適當十適當十倍稀釋樣品倍稀釋樣品選擇選擇3 3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液，個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液，每個稀釋度接種三管每個稀釋度接種三管LSTLST肉湯（每管肉湯（每管9mlLST9mlLST肉湯并加有導管），肉湯并加有導管），每管接種每管接種1mL1mL 35 35，24 24 2h 2h 48 48 2h 2h 沒有產(chǎn)氣管沒有產(chǎn)氣管 有產(chǎn)氣管有產(chǎn)氣管 報告陰性報告陰性 接種接種BGLBBGLB肉湯管肉湯管 接種接種ECEC肉湯肉湯 35 35 ，48 48 2h 2h 44.544.50.5 0.5 （水浴培養(yǎng)）（水浴培養(yǎng)）24 24 2h 48 2h 48 2h 2h 查查MPNMPN表報告結(jié)果表報告結(jié)果 產(chǎn)氣管接種產(chǎn)氣管接種EMBEMB平板（平板（3535、1824h1824h）（大腸菌群）（大腸菌群）從從EMBEMB平板上挑取平板上挑取5 5個可疑菌轉(zhuǎn)接到個可疑菌轉(zhuǎn)接到PCAPCA斜斜 面，進行革蘭氏染色、面，進行革蘭氏染色、IMVCIMVC生化鑒定、接生化鑒定、接 種種LSTLST復檢產(chǎn)氣復檢產(chǎn)氣 查查MPNMPN表報告結(jié)果（大腸桿菌）表報告結(jié)果（大腸桿菌）大腸菌群測定大腸菌群測定MPNMPN法檢驗幾點說明法檢驗幾點說明MPNMPN檢索表：檢索表：MPN MPN 為最大可能數(shù)為最大可能數(shù)(Most Probable Number)(Most Probable Number)的簡稱。的簡稱。這種方法，對樣品進行連續(xù)系列稀釋，加入培養(yǎng)基進行培這種方法，對樣品進行連續(xù)系列稀釋，加入培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，從規(guī)定的反應呈陽性管數(shù)的出現(xiàn)率，用概率論來推算養(yǎng)，從規(guī)定的反應呈陽性管數(shù)的出現(xiàn)率，用概率論來推算樣品中菌數(shù)最近似的數(shù)值。樣品中菌數(shù)最近似的數(shù)值。MPNMPN檢索表只給了三個稀釋度，檢索表只給了三個稀釋度，如改用不同的稀釋度，則表內(nèi)數(shù)字應相應降低或增加如改用不同的稀釋度，則表內(nèi)數(shù)字應相應降低或增加1010倍。倍。初發(fā)酵和證實試驗：初發(fā)酵和證實試驗：1 1）兩步法進行了兩次乳糖發(fā)酵試驗。初發(fā)酵和證實實）兩步法進行了兩次乳糖發(fā)酵試驗。初發(fā)酵和證實實驗所用培養(yǎng)基不同，但都是為了證實培養(yǎng)物是否符合大腸驗所用培養(yǎng)基不同，但都是為了證實培養(yǎng)物是否符合大腸菌群的定義，即菌群的定義，即“在在3737分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣”。LST LST中提中提供了磷酸鹽緩沖體系，氯化鈉可維持滲透壓，月桂基硫酸供了磷酸鹽緩沖體系，氯化鈉可維持滲透壓，月桂基硫酸鈉可抑制非大腸菌群的生長，這個緩沖蛋白胨乳糖肉湯允鈉可抑制非大腸菌群的生長，這個緩沖蛋白胨乳糖肉湯允許許“緩慢乳糖發(fā)酵（緩慢乳糖發(fā)酵（Slow lactose fermentationsSlow lactose fermentations）”來來促進菌體產(chǎn)氣。促進菌體產(chǎn)氣。BGLBBGLB中膽鹽和煌綠可以抑制革蘭氏陽性細中膽鹽和煌綠可以抑制革蘭氏陽性細菌和除了大腸菌群的很多革蘭氏陰性細菌。菌和除了大腸菌群的很多革蘭氏陰性細菌。2 2）初發(fā)酵陽性管，不能肯定就是大腸菌群細菌，經(jīng)過）初發(fā)酵陽性管，不能肯定就是大腸菌群細菌，經(jīng)過證實試驗后，有時可能成為陰性。有數(shù)據(jù)表明，食品中大證實試驗后，有時可能成為陰性。有數(shù)據(jù)表明，食品中大腸菌群檢驗步驟的符合率，初發(fā)酵與證實試驗相差較大。腸菌群檢驗步驟的符合率，初發(fā)酵與證實試驗相差較大。因此，在實際檢測工作中，證實試驗是必需的。因此，在實際檢測工作中，證實試驗是必需的。產(chǎn)氣量與倒管：產(chǎn)氣量與倒管：在乳糖發(fā)酵試驗工作中，經(jīng)常可以看到在發(fā)酵倒管內(nèi)在乳糖發(fā)酵試驗工作中，經(jīng)?？梢钥吹皆诎l(fā)酵倒管內(nèi)極微少的氣泡（有時比小米粒還小），有時可以遇到在初極微少的氣泡（有時比小米粒還小），有時可以遇到在初發(fā)酵時產(chǎn)酸或沿管壁有緩緩上浮的小氣泡。實驗表明，大發(fā)酵時產(chǎn)酸或沿管壁有緩緩上浮的小氣泡。實驗表明，大腸菌群的產(chǎn)氣量，多者可以使發(fā)酵倒管全部充滿氣體，少腸菌群的產(chǎn)氣量，多者可以使發(fā)酵倒管全部充滿氣體，少者可以產(chǎn)生比小米粒還小的氣泡。如果對產(chǎn)酸但未產(chǎn)氣的者可以產(chǎn)生比小米粒還小的氣泡。如果對產(chǎn)酸但未產(chǎn)氣的乳糖發(fā)酵如有疑問時，可以用手輕輕打動試管，如有氣泡乳糖發(fā)酵如有疑問時，可以用手輕輕打動試管，如有氣泡沿管壁上浮，即應考慮可能有氣體產(chǎn)生，而應作進一步試沿管壁上浮，即應考慮可能有氣體產(chǎn)生，而應作進一步試驗。驗。大腸桿菌測定大腸桿菌測定EMBEMB選擇性分離鑒別選擇性分離鑒別EMBEMB平板典型大腸桿平板典型大腸桿菌菌落特征：菌菌落特征：中心黑色或紫紅色，有中心黑色或紫紅色，有或無綠色金屬光澤或無綠色金屬光澤大腸桿菌測定大腸桿菌測定EMBEMB選擇性分離鑒別選擇性分離鑒別EMBEMB是一種弱選擇性培養(yǎng)基，是一種弱選擇性培養(yǎng)基，一些球菌也可在該培養(yǎng)基上生一些球菌也可在該培養(yǎng)基上生長；長；高壓滅菌可使得美藍還原從而高壓滅菌可使得美藍還原從而使培養(yǎng)基的顏色呈不均一橘黃使培養(yǎng)基的顏色呈不均一橘黃色，輕輕搖動培養(yǎng)基可以恢復色，輕輕搖動培養(yǎng)基可以恢復原有的正常紫色，傾注平板前原有的正常紫色，傾注平板前應先搖勻；應先搖勻；大腸桿菌在該培養(yǎng)基上并不一大腸桿菌在該培養(yǎng)基上并不一定總是呈現(xiàn)綠色的金屬光澤；定總是呈現(xiàn)綠色的金屬光澤；該培養(yǎng)基受可見光易使其中的該培養(yǎng)基受可見光易使其中的成分氧化，儲存及培養(yǎng)細菌時成分氧化，儲存及培養(yǎng)細菌時都應在避光條件。都應在避光條件。菌名菌落形態(tài)大腸埃希氏菌 紫黑色，有綠色金屬光澤肺炎克雷伯氏菌粉色，中心色深陰溝腸桿菌粉色，中心色深弗氏志賀氏菌無色鼠傷寒沙門氏菌 無色糞鏈球菌無色大腸桿菌測定大腸桿菌測定革蘭氏染色革蘭氏染色基本原理：基本原理：革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種重要革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種重要的鑒別染色法。的鑒別染色法。18841884年由丹麥醫(yī)師年由丹麥醫(yī)師GramGram創(chuàng)立。此法可將細創(chuàng)立。此法可將細菌分為革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌兩大類。菌分為革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌兩大類。革蘭氏染色的機理主要是利用兩類細菌的細胞革蘭氏染色的機理主要是利用兩類細菌的細胞壁成分和結(jié)構(gòu)的不同。革蘭氏陰性菌的細胞壁中含有較多壁成分和結(jié)構(gòu)的不同。革蘭氏陰性菌的細胞壁中含有較多的類脂質(zhì)，而肽聚糖的含量較少。當用酒精或丙酮酸脫色的類脂質(zhì)，而肽聚糖的含量較少。當用酒精或丙酮酸脫色時，類脂質(zhì)被溶解，增加了細胞壁的通透性，使初染后的時，類脂質(zhì)被溶解，增加了細胞壁的通透性，使初染后的結(jié)晶紫和碘的復合物易于滲出，結(jié)果細胞被脫色，經(jīng)復染結(jié)晶紫和碘的復合物易于滲出，結(jié)果細胞被脫色，經(jīng)復染后，又染上復染液的顏色。而革蘭氏陽性菌細胞壁中肽聚后，又染上復染液的顏色。而革蘭氏陽性菌細胞壁中肽聚糖的含量多而且交聯(lián)度大，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)乙醇或丙酮糖的含量多而且交聯(lián)度大，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)乙醇或丙酮洗脫后，肽聚糖層的孔徑變小，通透性降低，因此細胞仍洗脫后，肽聚糖層的孔徑變小，通透性降低，因此細胞仍保留初染時的顏色。保留初染時的顏色。大腸桿菌測定大腸桿菌測定革蘭氏染色革蘭氏染色Gram Gram negatnegativeiveGram Gram positpositiveiveGram Gram strainingstraining大腸桿菌測定大腸桿菌測定革蘭氏染色革蘭氏染色基本步驟：基本步驟：將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染液，染染液，染1min1min，水洗；，水洗；滴加革蘭氏碘液，作用滴加革蘭氏碘液，作用1min1min，水洗；，水洗；滴加滴加95%95%乙醇脫色約乙醇脫色約151530s,30s,直至染直至染色液被洗掉，不要過分脫色，水洗；色液被洗掉，不要過分脫色，水洗；滴加番紅復染液，復染滴加番紅復染液，復染1min1min，水洗、，水洗、待干、鏡檢。待干、鏡檢。結(jié)果：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭結(jié)果：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。氏陰性菌呈紅色。大腸桿菌測定大腸桿菌測定生化鑒定生化鑒定Testpositivenegativebiotype1 biotype2reagentIndole紅色環(huán)不變色+-KovacsMR紅色不變色+甲基紅V-P玫瑰紅色環(huán)不變色-V-P甲、乙液Citrate生長不生長-I I M M V Vi i C C生生化化試試驗驗金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌概述概述根據(jù)伯杰氏鑒定細菌學手冊，根據(jù)伯杰氏鑒定細菌學手冊，按葡萄球菌的生理化學組成，將按葡萄球菌的生理化學組成，將葡萄球菌分為金黃色葡萄球菌葡萄球菌分為金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(Staphylococcus aureus)、表皮、表皮葡萄球菌葡萄球菌(S.epidermidis)(S.epidermidis)和腐和腐生葡萄球菌生葡萄球菌(S.saprophyticus)(S.saprophyticus)，其中金葡多為致病性菌，表葡，其中金葡多為致病性菌，表葡偶爾致病。偶爾致病。金黃色葡萄球菌是人類化膿性感金黃色葡萄球菌是人類化膿性感染中最常見的病原菌?？梢鹁秩局凶畛Ｒ姷牟≡??？梢鹁植炕撔愿腥荆绨X、癰、皮下部化膿性感染，如癤、癰、皮下膿腫、外科切口及燒傷創(chuàng)面的感膿腫、外科切口及燒傷創(chuàng)面的感染；也可引起肺炎、偽膜性腸炎、染；也可引起肺炎、偽膜性腸炎、腎盂腎炎、心包炎等多系統(tǒng)的化腎盂腎炎、心包炎等多系統(tǒng)的化膿性感染；還可引起敗血癥、膿膿性感染；還可引起敗血癥、膿毒癥等全身性感染。葡萄球菌的毒癥等全身性感染。葡萄球菌的致病力強弱主要取決于其產(chǎn)生的致病力強弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶。毒素和侵襲性酶。金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌生物學特性生物學特性金黃色葡萄球菌呈球形，金黃色葡萄球菌呈球形，直直徑徑0.8m0.8m左右，排列成左右，排列成葡萄葡萄串狀串狀 ，無芽孢，無莢膜。，無芽孢，無莢膜。革蘭氏染色陽性，但衰老、革蘭氏染色陽性，但衰老、死亡或被白細胞吞噬的菌死亡或被白細胞吞噬的菌體，體，常呈革蘭氏陰性。常呈革蘭氏陰性。金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌生長特性生長特性金黃色葡萄球菌在肉湯中呈渾濁生長，在胰酪胨大豆肉湯金黃色葡萄球菌在肉湯中呈渾濁生長，在胰酪胨大豆肉湯內(nèi)有時液體澄清，菌量多時呈渾濁生長。內(nèi)有時液體澄清，菌量多時呈渾濁生長。l血平板上金黃色葡萄球菌血平板上金黃色葡萄球菌呈金黃色，有時也為白呈金黃色，有時也為白色，大而突起、圓形、色，大而突起、圓形、不透明、表面光滑，周不透明、表面光滑，周圍有溶血圈。圍有溶血圈。lBaird-ParkerBai