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1、實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)1：檢測(cè)生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)：檢測(cè)生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)一一.實(shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)原理：某些某些化學(xué)試劑化學(xué)試劑能夠使生物組織中的有關(guān)能夠使生物組織中的有關(guān)有有機(jī)化合物機(jī)化合物產(chǎn)生特定的產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)顏色反應(yīng)。如：。如：.還原性糖的鑒定：還原性糖的鑒定：還原性糖還原性糖+.脂肪的鑒定：脂肪的鑒定：脂肪脂肪+脂肪脂肪+.蛋白質(zhì)的鑒定：蛋白質(zhì)的鑒定：蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)+淀粉+斐林試劑斐林試劑磚紅色沉淀磚紅色沉淀蘇丹蘇丹染液染液橘黃色橘黃色蘇丹蘇丹染液染液紅色紅色雙縮脲試劑雙縮脲試劑紫色紫色碘碘藍(lán)色藍(lán)色2二二.目的要求：目的要求：嘗試用化學(xué)試劑檢測(cè)生物組織中糖類、嘗試用化學(xué)試劑檢測(cè)

2、生物組織中糖類、脂肪和蛋白質(zhì)脂肪和蛋白質(zhì)1 1、還原糖的檢測(cè)和觀察：、還原糖的檢測(cè)和觀察：選材選材 應(yīng)該選擇含應(yīng)該選擇含 量高量高.顏色為顏色為 以以蘋果蘋果.梨梨為最好。為最好。糖糖白色或近于白色白色或近于白色制備組織樣液：制備組織樣液：制漿制漿 過濾過濾 取液取液三三.實(shí)驗(yàn)過程實(shí)驗(yàn)過程:用一層紗布用一層紗布的植物組織，的植物組織，3可溶性還原糖與斐林試劑在加熱的過可溶性還原糖與斐林試劑在加熱的過程中生成磚紅色沉淀，程中生成磚紅色沉淀，說明植物組織說明植物組織樣液中含有樣液中含有還原糖還原糖。注入注入2mL2mL蘋果組蘋果組織樣液織樣液注入注入1mL1mL剛配制好的剛配制好的斐林試劑斐林試劑

3、水浴加熱約水浴加熱約2min2min呈色反應(yīng)呈色反應(yīng)變成變成磚紅色磚紅色50-650C的溫水的溫水結(jié)論：結(jié)論：甲乙液等量混勻現(xiàn)配現(xiàn)用甲乙液等量混勻現(xiàn)配現(xiàn)用振蕩、混振蕩、混合搖勻合搖勻呈呈現(xiàn)藍(lán)色現(xiàn)藍(lán)色4 還原糖有還原糖有 。試劑：試劑：.（甲液：（甲液：0.1g/ml 的的 ,乙液：乙液：0.05g/ml的的 .）甲乙液必須甲乙液必須 后再加入樣后再加入樣 液中，液中，。必須必須 。葡萄糖，果糖，麥芽糖葡萄糖，果糖，麥芽糖用水浴加熱用水浴加熱斐林試劑斐林試劑NaOHCuSO4等量混合均勻等量混合均勻現(xiàn)配現(xiàn)用現(xiàn)配現(xiàn)用注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：顏色變化：顏色變化：淺藍(lán)色淺藍(lán)色棕色棕色磚紅色磚紅色5思考：思

4、考：l1.為什么加入斐林試劑甲液和斐林試劑乙液為什么加入斐林試劑甲液和斐林試劑乙液時(shí)必須混合后再加入？時(shí)必須混合后再加入？l因?yàn)槿粝燃尤隢aOH溶液，還原性糖中的還原性半縮醛羥基易被氧化而失去還原性，再加入CuSO4溶液后不能產(chǎn)生Cu2O磚紅色沉淀，只有將其先配成Cu(OH)2懸濁液，才可產(chǎn)生磚紅色沉淀。62.斐林試劑甲液和乙液既然混合后使用，為什么不能在實(shí)驗(yàn)前配制好，一定要使用時(shí)臨時(shí)配制？l由一分析可知，鑒定試劑實(shí)質(zhì)上是Cu(OH)2懸濁液，很不穩(wěn)定，容易生成藍(lán)色Cu(OH)2沉淀，所以應(yīng)將甲液、乙液分別配制儲(chǔ)存，使用時(shí)再臨時(shí)配制7二、脂肪的檢測(cè)方法一：制作臨時(shí)切片二、脂肪的檢測(cè)方法一：制作

5、臨時(shí)切片（1）選材：經(jīng)浸泡去種皮的花生種子。選材：經(jīng)浸泡去種皮的花生種子。（2）檢測(cè)過程）檢測(cè)過程：制片制片選取最薄的切片置于潔凈的載玻片中央選取最薄的切片置于潔凈的載玻片中央制制成臨時(shí)裝片：滴成臨時(shí)裝片：滴1 2滴蒸餾水，蓋上蓋玻片滴蒸餾水，蓋上蓋玻片染色：在薄片上滴加染色：在薄片上滴加2 3滴蘇丹滴蘇丹染液，染色染液，染色2 3min洗去洗去浮色：用吸水紙吸去染液，滴加體積分?jǐn)?shù)為浮色：用吸水紙吸去染液，滴加體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精的酒精1 2滴滴鏡鏡觀察：觀察：在低倍鏡下尋找到已著色的圓在低倍鏡下尋找到已著色的圓形小顆粒，然后用高倍鏡觀察。形小顆粒，然后用高倍鏡觀察。切片：切片：花生種子（浸

6、泡花生種子（浸泡h），去皮，），去皮，將子葉削成薄片。將子葉削成薄片。視野中視野中有橘黃有橘黃色顆粒色顆粒橘黃色小圓顆粒橘黃色小圓顆粒即為脂肪顆粒即為脂肪顆粒脂肪脂肪+蘇丹蘇丹（或蘇丹（或蘇丹）染液）染液 橘黃色（或紅色）橘黃色（或紅色）注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：切片要切片要薄，薄，如厚薄不均就會(huì)導(dǎo)致觀察如厚薄不均就會(huì)導(dǎo)致觀察時(shí)有的地方清晰有的地方模糊。時(shí)有的地方清晰有的地方模糊。酒精的作用是：酒精的作用是：。需需使用顯微鏡觀察使用顯微鏡觀察 使用不同的染色劑染色時(shí)間不同使用不同的染色劑染色時(shí)間不同顏色變化：顏色變化：。洗去浮色洗去浮色橘黃色或紅色橘黃色或紅色113 3、蛋白質(zhì)的檢測(cè)和觀察：、蛋白質(zhì)

7、的檢測(cè)和觀察：選材選材 應(yīng)該選擇含應(yīng)該選擇含 豐富豐富 的的豆?jié){豆?jié){或或雞蛋清雞蛋清溶液（避免材料自身的顏色對(duì)實(shí)溶液（避免材料自身的顏色對(duì)實(shí) 驗(yàn)變化顏色的掩蓋）驗(yàn)變化顏色的掩蓋）蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)黃豆?jié){濾液或蛋清稀釋液黃豆?jié){濾液或蛋清稀釋液制備組織樣液制備組織樣液呈色反應(yīng)呈色反應(yīng)組織組織樣液樣液2mL2mL雙縮脲試雙縮脲試劑劑A A液液1mL1mL雙縮脲試雙縮脲試劑劑B B液液4 4滴滴搖勻后變搖勻后變成紫色成紫色結(jié)論：結(jié)論：說明組織樣液中存在蛋白質(zhì)。說明組織樣液中存在蛋白質(zhì)。12（3 3）注意事項(xiàng)：）注意事項(xiàng)：試劑：試劑：（A液：液：0.1g/ml的的 ；B液：液：0.01g/ml的的 ）先加先加

8、 ，再加，再加 。注意：注意：先加入試劑先加入試劑A，造成堿性環(huán)境，而只有在堿性環(huán)境中，蛋白質(zhì)才，造成堿性環(huán)境，而只有在堿性環(huán)境中，蛋白質(zhì)才容易與容易與Cu離子發(fā)生顏色反應(yīng)，形成紫色的絡(luò)合物。離子發(fā)生顏色反應(yīng)，形成紫色的絡(luò)合物。B液要求量適中液要求量適中，否則，否則多余的多余的B液液將會(huì)將會(huì)與與A液液發(fā)生反應(yīng)生成大發(fā)生反應(yīng)生成大量藍(lán)色量藍(lán)色Cu(OH)2沉淀沉淀而遮蓋試驗(yàn)中所產(chǎn)生的紫色而遮蓋試驗(yàn)中所產(chǎn)生的紫色。同樣為了防同樣為了防止生成較止生成較Cu(OH)2沉淀遮蔽實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在配制溶液時(shí)，雙縮脲試劑沉淀遮蔽實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在配制溶液時(shí)，雙縮脲試劑B比比斐林試劑乙液濃度小得多，這也是斐林試劑和雙縮脲

9、試劑不能互換使用的道斐林試劑乙液濃度小得多，這也是斐林試劑和雙縮脲試劑不能互換使用的道理。理。鑒定前，留出一部分組織樣液，以便對(duì)比鑒定前，留出一部分組織樣液，以便對(duì)比。用于蛋白質(zhì)鑒定的蛋清必須稀釋，以免實(shí)驗(yàn)后粘住試管壁，不易洗刷用于蛋白質(zhì)鑒定的蛋清必須稀釋，以免實(shí)驗(yàn)后粘住試管壁，不易洗刷雙縮脲試劑雙縮脲試劑A A液液1ml1mlB B液液4 4滴滴NaOHCuSO4蛋白質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果13斐林試劑與雙縮脲試劑的比較：斐林試劑與雙縮脲試劑的比較：A A液液:0.1g/mLNaOH:0.1g/mLNaOHB B液液:0.010.01g/mLCuSOg/mLCuSO4 4甲液甲液:0.1g/mLNaOH

10、:0.1g/mLNaOH乙液乙液:0.050.05g/mLCuSOg/mLCuSO4 4紫色物質(zhì)生成紫色物質(zhì)生成磚紅色沉淀磚紅色沉淀先加先加A A液液，再加再加B B液液，不不需加熱需加熱甲液與乙液甲液與乙液先混再用先混再用，且且現(xiàn)配現(xiàn)用現(xiàn)配現(xiàn)用，需，需加熱加熱蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)還原性糖還原性糖試劑試劑組成組成檢驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果結(jié)果試劑試劑用法用法檢測(cè)檢測(cè)對(duì)象對(duì)象雙縮脲試劑雙縮脲試劑斐林試劑斐林試劑14比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目斐林試劑斐林試劑雙縮脲試劑雙縮脲試劑不不同同點(diǎn)點(diǎn)使用方法使用方法甲液和乙液混合均勻后方可甲液和乙液混合均勻后方可使用，且使用，且現(xiàn)配現(xiàn)用現(xiàn)配現(xiàn)用使用時(shí)先加使用時(shí)先加A液再加液再加B液液反應(yīng)條

11、件反應(yīng)條件需需50-65水浴加熱水浴加熱不需加熱即可反應(yīng)不需加熱即可反應(yīng)反應(yīng)原理反應(yīng)原理還原糖中的醛基被還原糖中的醛基被Cu（OH）2 懸濁液氧化懸濁液氧化,Cu（OH）2被還原為被還原為磚紅磚紅色色Cu2O沉淀沉淀具有兩個(gè)以上肽鍵的化合物具有兩個(gè)以上肽鍵的化合物在堿性條件下與在堿性條件下與Cu2+反應(yīng)生反應(yīng)生成成紫色紫色絡(luò)合物絡(luò)合物顏色顏色磚紅色磚紅色紫色紫色濃度濃度乙液乙液CuSO4濃度為濃度為0.05 g/mLB液液CuSO4濃度為濃度為0.01g/mL相同點(diǎn)相同點(diǎn) 都含有都含有NaOH、CuSO4兩種成分，且所用兩種成分，且所用NaOH濃度都是濃度都是0.1g/mL斐林斐林試劑與雙縮脲

12、試劑都由試劑與雙縮脲試劑都由NaOH和和CuSO4組成，但二者有如組成，但二者有如下三點(diǎn)不同：下三點(diǎn)不同：溶液濃度不同。斐林試劑中溶液濃度不同。斐林試劑中NaOH的濃度為的濃度為0.1g/mL，CuSO4的濃度為的濃度為0.05g/mL；雙縮脲試劑中；雙縮脲試劑中NaOH的濃度為的濃度為0.1g/mL，CuSO4的濃度為的濃度為0.01g/mL。使用原理不同。斐林試劑實(shí)質(zhì)是新配制的使用原理不同。斐林試劑實(shí)質(zhì)是新配制的Cu(OH)2溶液；雙溶液；雙縮脲試劑實(shí)質(zhì)是在堿性環(huán)境下的縮脲試劑實(shí)質(zhì)是在堿性環(huán)境下的Cu2。使用方法不同。使用斐林試劑時(shí)，先把使用方法不同。使用斐林試劑時(shí)，先把NaOH溶液和溶液和CuSO4溶液混合，然后立即使用。使用雙縮脲試劑時(shí)，先加入溶液混合，然后立即使用。使用雙縮脲試劑時(shí)，先加入NaOH溶液，然后再加入溶液，然后再加入CuSO4溶液。溶液。淀粉的檢測(cè)和觀察：淀粉的檢測(cè)和觀察：取材：取材：馬鈴薯勻漿馬鈴薯勻漿檢測(cè)檢測(cè)組織組織樣液樣液2mL2mL碘液碘液2 2滴滴結(jié)論：結(jié)論：說明組織樣液中存在淀粉。說明組織樣液中存在淀粉。注意：注意：常用材料：馬鈴薯常用材料：馬鈴薯 試劑：試劑：。顏色變化：。顏色變化：。碘液碘液變藍(lán)變藍(lán)搖勻后變搖勻后變成藍(lán)色成藍(lán)色17