【高中生物選修一知識點(diǎn)總結(jié)】高中生物選修三知識點(diǎn)總結(jié).docx
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1、【高中生物選修一知識點(diǎn)總結(jié)】高中生物選修三知識點(diǎn)總結(jié)高中生物選修三知識點(diǎn)基因工程的概念更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計和施工的,又叫做DNA重組技術(shù)。(一)基因工程的基本工具1.“分子手術(shù)刀”限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)(2)功能:能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開,因此具有專一性。(3)結(jié)果:經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DN段末端通常有兩種形式:黏性末端和平末端。2.“分子縫合針”DNA連接酶(1)兩種DNA連接酶(DNA連接酶和DNA連接酶)的比較:相同點(diǎn):都縫合磷酸二酯鍵。區(qū)別:DNA連接
2、酶來源于T4噬菌體,只能將雙鏈DN段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來;而T4DNA連接酶能縫合兩種末端,但連接平末端的之間的效率較低。酶是連接兩個DN段的末端,形成磷酸二酯鍵。3.“分子運(yùn)輸車”載體(1)載體具備的條件:能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。具有一至多個限制酶切點(diǎn),供外源DN段插入。具有標(biāo)記基因,供重組DNA的鑒定和選擇。(2)最常用的載體是質(zhì)粒,它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單的、獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外,并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。(3)其它載體:噬菌體的衍生物、動植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步:目的基因的獲取從基因文庫中獲取1、獲取目的基因的方法鳥槍法人工合成2
3、.目的基因是指:編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。3.原核基因采取直接分離獲得,真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法_和化學(xué)合成法_。4.PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因(1)原理:DNA雙鏈復(fù)制(2)過程:第一步:加熱至9095DNA解鏈;第二步:冷卻到5560,引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈;第三步:加熱至7075,熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成。第二步:基因表達(dá)載體的構(gòu)建1.目的:使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳至下一代,使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。2.組成:目的基因啟動子終止子標(biāo)記基因(1)啟動子:是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DN段,位于基因的首端,是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位,
4、能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA,最終獲得所需的蛋白質(zhì)。(2)終止子:也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DN段,位于基因的尾端。(3)標(biāo)記基因的作用:是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因,從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。常用的標(biāo)記基因是抗生素基因。3、目的基因與運(yùn)載體結(jié)合(以質(zhì)粒為運(yùn)載體)第三步:將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞_1將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞受體細(xì)胞:細(xì)菌氯化鈣細(xì)胞壁的通透性增大重組質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞目的基因隨受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制2.轉(zhuǎn)化的概念:是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。3.常用的轉(zhuǎn)化方法:將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞:采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,其次還有基因槍法和花粉管通道法等
5、。將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞:最常用的方法是顯微注射技術(shù)。此方法的受體細(xì)胞多是受精卵。將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞:原核生物作為受體細(xì)胞的原因是繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳2+物質(zhì)相對較少,最常用的原核細(xì)胞是大腸桿菌,其轉(zhuǎn)化方法是:先用Ca處理細(xì)胞,使其成為感受態(tài)細(xì)胞,再將重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合。4.重組細(xì)胞導(dǎo)入受體細(xì)胞后,篩選含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達(dá)。第四步:目的基因的檢測和表達(dá)1.首先要檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因,方法是采用DNA分子雜交技術(shù)。2.其次還要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA,方法是采用用標(biāo)記的目的基因作探針與mRN
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