第二講分子生物學(xué)實驗室儀器操作簡介方案課件.ppt
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1、第二講第二講 實驗室常用儀器設(shè)實驗室常用儀器設(shè)備簡介及操作備簡介及操作 微量移液器微量移液器 高速臺式離心機(jī)高速臺式離心機(jī) PCRPCR儀儀 凝膠成像系統(tǒng)凝膠成像系統(tǒng) 電泳儀電泳儀 恒溫氣浴搖床恒溫氣浴搖床 超凈工作臺超凈工作臺 滅菌鍋滅菌鍋1.微量移液器微量移液器 微量移液器有數(shù)字可調(diào)式和固定式兩種型號,是計量微量移液器有數(shù)字可調(diào)式和固定式兩種型號,是計量和轉(zhuǎn)移液體的專用儀器,其裝有直接讀數(shù)容量計。和轉(zhuǎn)移液體的專用儀器,其裝有直接讀數(shù)容量計。微量移液器有多種規(guī)格,在移液器量程范圍內(nèi)能連續(xù)微量移液器有多種規(guī)格,在移液器量程范圍內(nèi)能連續(xù)調(diào)節(jié)讀數(shù)。調(diào)節(jié)讀數(shù)。量液的操作步驟:量液的操作步驟:第一停點
2、第二停點A A 保持微量移液器垂直,將按鈕壓至第一停點;保持微量移液器垂直,將按鈕壓至第一停點;B B 微量移液器頭尖端浸入溶液,緩慢釋放按鈕;微量移液器頭尖端浸入溶液,緩慢釋放按鈕;C C 保持微量移液器垂直,將微量移液器頭與容器壁接觸,慢保持微量移液器垂直,將微量移液器頭與容器壁接觸,慢 慢壓下按鈕至第一停點;慢壓下按鈕至第一停點;D D 壓至第二停點把溶液完全釋放出;壓至第二停點把溶液完全釋放出;E E 釋放按鈕回原狀。釋放按鈕回原狀。1 1 1 1 未裝吸嘴的微量移液器絕對不可用來吸取任何液體。未裝吸嘴的微量移液器絕對不可用來吸取任何液體。未裝吸嘴的微量移液器絕對不可用來吸取任何液體。
3、未裝吸嘴的微量移液器絕對不可用來吸取任何液體。2 2 2 2 一定要在允許量程范圍內(nèi)設(shè)定容量,千萬不要將讀一定要在允許量程范圍內(nèi)設(shè)定容量,千萬不要將讀一定要在允許量程范圍內(nèi)設(shè)定容量,千萬不要將讀一定要在允許量程范圍內(nèi)設(shè)定容量,千萬不要將讀 數(shù)的調(diào)節(jié)超出其適用的刻度范圍,否則會造成損壞。數(shù)的調(diào)節(jié)超出其適用的刻度范圍,否則會造成損壞。數(shù)的調(diào)節(jié)超出其適用的刻度范圍,否則會造成損壞。數(shù)的調(diào)節(jié)超出其適用的刻度范圍,否則會造成損壞。3 3 3 3 不要橫放或倒拿帶有殘余液體吸嘴的移液器。不要橫放或倒拿帶有殘余液體吸嘴的移液器。不要橫放或倒拿帶有殘余液體吸嘴的移液器。不要橫放或倒拿帶有殘余液體吸嘴的移液器。
4、4 4 4 4 不要用大量程的移液器移取小體積樣品。不要用大量程的移液器移取小體積樣品。不要用大量程的移液器移取小體積樣品。不要用大量程的移液器移取小體積樣品。5.5.5.5.移液器使用完后,將刻度調(diào)到最大刻度,收藏。移液器使用完后,將刻度調(diào)到最大刻度,收藏。移液器使用完后,將刻度調(diào)到最大刻度,收藏。移液器使用完后,將刻度調(diào)到最大刻度,收藏。量液操作注意問題:量液操作注意問題:量液操作注意問題:量液操作注意問題:2.臺式高速離心機(jī)臺式高速離心機(jī)離心機(jī)的分類離心機(jī)的分類低速:每分鐘幾千轉(zhuǎn)低速:每分鐘幾千轉(zhuǎn)高速:每分鐘高速:每分鐘13萬轉(zhuǎn)萬轉(zhuǎn)超速:每分鐘超速:每分鐘3萬轉(zhuǎn)以上萬轉(zhuǎn)以上低速:細(xì)胞等大
5、分子低速:細(xì)胞等大分子 高速:高速:DNADNA,蛋白等,蛋白等 超速超速:病毒,蛋白,細(xì)胞器等病毒,蛋白,細(xì)胞器等基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實驗中都離不開低溫離心技術(shù)的分離制備實驗中都離不開低溫離心技術(shù) 離心機(jī)的功能:分離離心機(jī)的功能:分離純純化化1 1 1 1、把離心機(jī)放置于平面桌或平面臺上,檢查離心機(jī)是否、把離心機(jī)放置于平面桌或平面臺上,檢查離心機(jī)是否、把離心機(jī)放置于平面桌或平面臺上,檢查離心機(jī)是否、把離心機(jī)放置于平面桌或平面臺上,檢查離心機(jī)是否 放置平穩(wěn)。放置平穩(wěn)。放置平穩(wěn)。放置平穩(wěn)。2 2 2 2、將
6、離心管對稱放入轉(zhuǎn)子內(nèi),且要事先平衡。、將離心管對稱放入轉(zhuǎn)子內(nèi),且要事先平衡。、將離心管對稱放入轉(zhuǎn)子內(nèi),且要事先平衡。、將離心管對稱放入轉(zhuǎn)子內(nèi),且要事先平衡。3 3 3 3、鎖緊門蓋。、鎖緊門蓋。、鎖緊門蓋。、鎖緊門蓋。4 4 4 4、插上電源插座,按下電源開關(guān)。、插上電源插座,按下電源開關(guān)。、插上電源插座,按下電源開關(guān)。、插上電源插座,按下電源開關(guān)。5 5 5 5、設(shè)置轉(zhuǎn)子號、轉(zhuǎn)速、時間、設(shè)置轉(zhuǎn)子號、轉(zhuǎn)速、時間、設(shè)置轉(zhuǎn)子號、轉(zhuǎn)速、時間、設(shè)置轉(zhuǎn)子號、轉(zhuǎn)速、時間.注意:對應(yīng)的轉(zhuǎn)子不可超速使用,否則對試管或轉(zhuǎn)子有損壞。注意:對應(yīng)的轉(zhuǎn)子不可超速使用,否則對試管或轉(zhuǎn)子有損壞。注意:對應(yīng)的轉(zhuǎn)子不可超速使用
7、,否則對試管或轉(zhuǎn)子有損壞。注意:對應(yīng)的轉(zhuǎn)子不可超速使用,否則對試管或轉(zhuǎn)子有損壞。6 6 6 6、當(dāng)轉(zhuǎn)子停轉(zhuǎn)后,打開門蓋取出離心管,關(guān)斷電源開關(guān)。、當(dāng)轉(zhuǎn)子停轉(zhuǎn)后,打開門蓋取出離心管,關(guān)斷電源開關(guān)。、當(dāng)轉(zhuǎn)子停轉(zhuǎn)后,打開門蓋取出離心管,關(guān)斷電源開關(guān)。、當(dāng)轉(zhuǎn)子停轉(zhuǎn)后,打開門蓋取出離心管,關(guān)斷電源開關(guān)。臺式高速離心機(jī)使用步驟臺式高速離心機(jī)使用步驟注意事項注意事項注意事項注意事項:1 1 1 1、離心機(jī)在運轉(zhuǎn)時,不得移動離心機(jī),不要打開門蓋。、離心機(jī)在運轉(zhuǎn)時,不得移動離心機(jī),不要打開門蓋。、離心機(jī)在運轉(zhuǎn)時,不得移動離心機(jī),不要打開門蓋。、離心機(jī)在運轉(zhuǎn)時,不得移動離心機(jī),不要打開門蓋。2 2 2 2、安放離
8、心機(jī)的臺面應(yīng)堅實平整,四只橡膠機(jī)腳都應(yīng)與臺、安放離心機(jī)的臺面應(yīng)堅實平整,四只橡膠機(jī)腳都應(yīng)與臺、安放離心機(jī)的臺面應(yīng)堅實平整,四只橡膠機(jī)腳都應(yīng)與臺、安放離心機(jī)的臺面應(yīng)堅實平整,四只橡膠機(jī)腳都應(yīng)與臺面接觸和均勻受力,以免產(chǎn)生振動。面接觸和均勻受力,以免產(chǎn)生振動。面接觸和均勻受力,以免產(chǎn)生振動。面接觸和均勻受力,以免產(chǎn)生振動。3 3 3 3、離心管加液要平衡,若加液差異過大運轉(zhuǎn)時會產(chǎn)生大的、離心管加液要平衡,若加液差異過大運轉(zhuǎn)時會產(chǎn)生大的、離心管加液要平衡,若加液差異過大運轉(zhuǎn)時會產(chǎn)生大的、離心管加液要平衡,若加液差異過大運轉(zhuǎn)時會產(chǎn)生大的振動,此時應(yīng)停機(jī)檢查,使加液符合要求,離心試管必須振動,此時應(yīng)停機(jī)
9、檢查,使加液符合要求,離心試管必須振動,此時應(yīng)停機(jī)檢查,使加液符合要求,離心試管必須振動,此時應(yīng)停機(jī)檢查,使加液符合要求,離心試管必須對稱放入。對稱放入。對稱放入。對稱放入。4 4 4 4、若運轉(zhuǎn)時有離心試管破裂,會引起較大振動應(yīng)立即停機(jī)、若運轉(zhuǎn)時有離心試管破裂,會引起較大振動應(yīng)立即停機(jī)、若運轉(zhuǎn)時有離心試管破裂,會引起較大振動應(yīng)立即停機(jī)、若運轉(zhuǎn)時有離心試管破裂,會引起較大振動應(yīng)立即停機(jī)處理。處理。處理。處理。5 5 5 5、離心機(jī)徹底停止后,才可開蓋,取樣。、離心機(jī)徹底停止后,才可開蓋,取樣。、離心機(jī)徹底停止后,才可開蓋,取樣。、離心機(jī)徹底停止后,才可開蓋,取樣。低溫冷凍離心機(jī)1.1.把離心機(jī)
10、水平安放于地面把離心機(jī)水平安放于地面2.2.使用前開機(jī)預(yù)冷使用前開機(jī)預(yù)冷3.3.對應(yīng)轉(zhuǎn)子重量要平衡對應(yīng)轉(zhuǎn)子重量要平衡4.4.按操作規(guī)程操作按操作規(guī)程操作3.PCR儀儀 PCR儀主要應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等許多領(lǐng)域,儀主要應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等許多領(lǐng)域,如基因分析、序列分析、進(jìn)化分析、臨床診斷、法醫(yī)如基因分析、序列分析、進(jìn)化分析、臨床診斷、法醫(yī)學(xué)等。學(xué)等。PCR儀,也稱儀,也稱DNA熱循環(huán)儀、基因擴(kuò)增儀,能使熱循環(huán)儀、基因擴(kuò)增儀,能使一對寡核苷酸引物結(jié)合到正負(fù)一對寡核苷酸引物結(jié)合到正負(fù)DNA鏈上的靶序列兩鏈上的靶序列兩側(cè),從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬倍的靶序列側(cè),從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬倍的靶
11、序列DNA片片段,它的每一循環(huán)包括段,它的每一循環(huán)包括DNA變性、復(fù)性、延伸三個變性、復(fù)性、延伸三個反應(yīng)。反應(yīng)。操作程序操作程序:1 1)開機(jī):打開電源,顯示主界面;)開機(jī):打開電源,顯示主界面;2 2)創(chuàng)建程序:使用)創(chuàng)建程序:使用”createcreate”輸入新程序(包括輸入新程序(包括PCRPCR循循 環(huán)數(shù),預(yù)變性、變性、復(fù)性、延伸的時間和溫環(huán)數(shù),預(yù)變性、變性、復(fù)性、延伸的時間和溫 度),保存程序(包括用戶名和方法名)度),保存程序(包括用戶名和方法名);3 3)放入樣品,蓋上蓋子)放入樣品,蓋上蓋子;4 4)在所建用戶名下按)在所建用戶名下按“runrun”鍵,找到設(shè)定的程序,鍵,找
12、到設(shè)定的程序,按按“startstart”鍵鍵啟動程序啟動程序;5 5)運行結(jié)束后按)運行結(jié)束后按“stopstop”鍵停止運行,取出樣品,關(guān)鍵停止運行,取出樣品,關(guān)閉電源。閉電源。1 1、預(yù)變性:可用、預(yù)變性:可用、預(yù)變性:可用、預(yù)變性:可用94949595,2 210min,10min,一般用一般用一般用一般用 5min5min。2 2、變性:一般用、變性:一般用、變性:一般用、變性:一般用9494,30s2min,30s2min,一般一般一般一般45s1min45s1min。3 3、退火:溫度自定,、退火:溫度自定,、退火:溫度自定,、退火:溫度自定,30s2min30s2min。4 4
13、、延伸:、延伸:、延伸:、延伸:7272,對于,對于,對于,對于(1kb=1min,(1kb=1min,每增加每增加每增加每增加1kb1kb加加加加1min)1min)。5 5、循環(huán)數(shù):一般、循環(huán)數(shù):一般、循環(huán)數(shù):一般、循環(huán)數(shù):一般25253535個循環(huán)個循環(huán)個循環(huán)個循環(huán)(2,3,4(2,3,4步循環(huán))。步循環(huán))。步循環(huán))。步循環(huán))。6 6、最終延伸:、最終延伸:、最終延伸:、最終延伸:7272,5 515min15min。7 7、保存:、保存:、保存:、保存:4 4,時間設(shè)為,時間設(shè)為,時間設(shè)為,時間設(shè)為0-60min0-60min。8 8、ENDEND。如何設(shè)置如何設(shè)置如何設(shè)置如何設(shè)置PC
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