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1、1、革蘭染色2、抗酸染色3、墨汁染色革蘭氏染色革蘭氏染色原理革蘭氏染色原理一 通透性學說二 等電點學說三 化學學說 G-/G+細菌細胞壁比較示意圖細菌細胞壁比較示意圖肽聚糖層肽聚糖層磷脂層磷脂層LPS磷壁酸磷壁酸 革蘭氏陽性菌革蘭氏陽性菌細胞壁細胞壁結構比較結構比較致密，肽聚糖層很厚，脂類含量致密，肽聚糖層很厚，脂類含量較少，酒精不易滲入，而且較少，酒精不易滲入，而且95酒精可使細胞壁脫水，間隙變小，酒精可使細胞壁脫水，間隙變小，通透性降低，阻礙通透性降低，阻礙結晶紫結晶紫-碘碘復合復合物滲出；物滲出；革蘭氏陰性菌細胞壁結構比較革蘭氏陰性菌細胞壁結構比較疏松，肽聚糖層很薄，外膜、脂疏松，肽聚糖

2、層很薄，外膜、脂蛋白、脂多糖均含有大量蛋白、脂多糖均含有大量脂質脂質，易被酒精溶解，致使細胞壁通透易被酒精溶解，致使細胞壁通透性增高，細胞內的結晶紫性增高，細胞內的結晶紫-碘復合碘復合物被酒精溶解洗出而脫色。物被酒精溶解洗出而脫色。原理原理一一一一 通透性學說通透性學說通透性學說通透性學說二 等電點學說三 化學學說 革蘭氏陽性菌革蘭氏陽性菌等電點等電點（pH 2-3）比革蘭氏陰性菌等電點）比革蘭氏陰性菌等電點（pH 4-5）低，加之媒染劑）低，加之媒染劑碘為弱氧化劑能降低革蘭氏碘為弱氧化劑能降低革蘭氏陽性菌的等電點，因此在同陽性菌的等電點，因此在同樣的樣的pH的染色環(huán)境中，陽性的染色環(huán)境中，陽

3、性菌所帶菌所帶負電荷負電荷比陰性菌多，比陰性菌多，與帶正電荷的結晶紫染料能與帶正電荷的結晶紫染料能牢固結合，不易被酒精脫色。牢固結合，不易被酒精脫色。原理原理一 通透性學說二二二二 等電點學說等電點學說等電點學說等電點學說三 化學學說 革蘭氏陽性菌含有大量革蘭氏陽性菌含有大量核糖核糖核酸鎂鹽核酸鎂鹽，其可與，其可與結晶紫結晶紫-碘碘結合成大分子復合物，因而結合成大分子復合物，因而不易被不易被95酒精脫色；而陰酒精脫色；而陰性菌中此物質含量較少，因性菌中此物質含量較少，因而吸附染料量很少，分子量而吸附染料量很少，分子量也較小，故易被酒精脫色。也較小，故易被酒精脫色。原理原理一 通透性學說二 等電

4、點學說三三 化學學說化學學說 細菌涂片的制備細菌涂片的制備涂片涂片：取一張潔凈載玻片，用已滅菌的接種環(huán)取一環(huán)：取一張潔凈載玻片，用已滅菌的接種環(huán)取一環(huán)生理鹽水于玻片中央，再將接種環(huán)滅菌，生理鹽水于玻片中央，再將接種環(huán)滅菌，取菌與生理取菌與生理鹽水磨勻鹽水磨勻，涂布成，涂布成1cm1cm1cm1cm大小區(qū)域的均勻薄膜，使大小區(qū)域的均勻薄膜，使鹽水磨成灰白色為宜，接種環(huán)滅菌后放回試管架。鹽水磨成灰白色為宜，接種環(huán)滅菌后放回試管架。干燥干燥：涂片最好在室溫下自然干燥或將標本片涂抹面：涂片最好在室溫下自然干燥或將標本片涂抹面向上，置酒精燈火焰上半尺高處向上，置酒精燈火焰上半尺高處慢慢烘干慢慢烘干。固定

5、固定：常用火焰加熱法，手執(zhí)載玻片一端，標本面向：常用火焰加熱法，手執(zhí)載玻片一端，標本面向上，上，迅速來回通過火焰三次迅速來回通過火焰三次。注意點注意點 取菌量不可太多取菌量不可太多，涂片應均勻，否則影響染色結果，涂片應均勻，否則影響染色結果 干燥時切忌高熱干燥時切忌高熱，以免細菌變形，以免細菌變形 固定時溫度不可過高時間不可長，以防涂抹面固定時溫度不可過高時間不可長，以防涂抹面 燒焦及玻片燒裂燒焦及玻片燒裂固定的目的固定的目的殺死細菌，使菌體蛋白凝固，染料易于著色殺死細菌，使菌體蛋白凝固，染料易于著色改變細菌通透性，以利于染料進入細胞內改變細菌通透性，以利于染料進入細胞內使菌體與玻片粘附牢固，

6、在染色時不致被染使菌體與玻片粘附牢固，在染色時不致被染 料和水沖掉料和水沖掉BASO快速革蘭染色快速革蘭染色1.1.初染初染：加龍膽紫液染色10秒，水洗，甩干2.2.媒染媒染：加碘液數(shù)滴，染色10秒，水洗，甩干3.3.脫色脫色：加脫色液脫色，不時搖動約1020秒，至無紫色脫落為止，水洗，甩干 4.4.復染復染：加沙黃溶液復染10秒，水洗，甩干5.吸水紙吸干，油鏡觀察標本 注意事項1染液方面：1）試劑用完后，請迅速蓋好，以免揮發(fā)。2）脫色液用完后，可用丙酮作為代用脫色液，脫色時間可稍短。3）試劑效期過后，請不要使用。試劑盒儲存時，盡量避免高、低溫環(huán)境及陽光直射。2涂片染色技術方面：1）涂片不能太

7、厚，太厚時常不易完全脫色，使陰性菌呈紫色。2）涂片后最好自然干燥，若用火焰干燥或固定不能太靠近火焰，以免破壞菌體或炭化。3）脫色時注意勿脫過頭，使陽性變成陰性，尤其是鏈球菌很容易脫過頭變成陰性。4）染色時間要掌握好。3.觀察細菌形態(tài)或染色性不能用幼齡菌或衰老菌，一般采用培養(yǎng)16-18小時的菌落或菌液涂片染色。革蘭染色意義革蘭染色意義鑒別細菌鑒別細菌 革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌選擇藥物選擇藥物 革蘭氏陽性菌對青霉素等敏感革蘭氏陽性菌對青霉素等敏感 革蘭氏陰性菌對鏈霉素等敏感革蘭氏陰性菌對鏈霉素等敏感與細菌的致病性有關與細菌的致病性有關 革蘭氏陽性菌產生外毒素革蘭氏陽性菌

8、產生外毒素 革蘭氏陰性菌產生內毒素革蘭氏陰性菌產生內毒素抗酸染色抗酸染色原理：結核菌、麻瘋桿菌、恥垢菌等抗酸性菌，因其菌體表面有一層類脂或脂質而不易著色，但一經著色后酸或已醇的作用亦是不易脫色。利用此特性并以增強的染色液染色，然后再用酸及乙醇加處理，使其脫色后再對比染色，此時抗酸性菌仍是固定著最初色素的顏色（紅色），而其他細菌及背景中的物質為藍色。操作步驟操作步驟1、涂片經火焰固定，加石碳酸復紅溶液用火焰微熱至出現(xiàn)蒸氣約3分鐘（防止染液蒸發(fā)干，必要時可續(xù)加第一液數(shù)滴，水洗。2、用3%鹽酸酒精脫色約1分鐘，直至涂片無色或淡粉紅色為止，水洗3、再加復染液復染1分鐘，水洗，干后鏡檢。結果判斷結果判斷

9、 抗酸桿菌呈紅色，其他細菌及細胞呈藍色。注意事項注意事項1抗酸染色直接用于痰標本時，可以適當增加標本涂片的厚度，發(fā)提高檢出率。染厚涂片時，須掌握復染時間，如果背景過深，會影響鏡檢。痰標本找抗酸桿菌，應先高壓殺菌，避免實驗室污染。2尿、糞中找到抗酸桿菌須作潘氏染色，排除恥后桿菌，才能報告。標本中找到抗酸桿菌，須作傳染病報告。3離心應為3000轉/分，30分鐘。4涂片至少保留三個月。墨汁染色通常用于檢查腦脊液或分泌物涂片中的隱球菌，具有方便、快速、節(jié)約成本等優(yōu)點，是涂片中檢查隱球菌感染的首選方法。隱球菌：顯微鏡暗視野（負染）下找隱球菌，可見圓形菌體，外周有一圈透明的肥厚莢膜，內有反光孢子，但無菌絲。反復多次查找 陽性率高，腦脊液應離心后沉淀涂片。隱球菌墨汁染色陽性，需進一步做真菌培養(yǎng)操作步驟：腦脊液等其他標本離心取沉淀物或者挑取菌液1環(huán)涂于沽凈玻片上，然后加印度墨汁1環(huán)，覆以蓋玻片后鏡檢。鏡下背景呈黑褐色，菌體無色透明。結果判斷新型隱球菌可呈寬闊透亮的厚莢膜，背景為纖細均勻的黑色，白細胞被染成黑色不透亮，但核形明顯。注意事項1、不要使用過期的印度墨汁。2、墨汁應無污染、無顆粒等。