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1、 SPIFE4000全自動(dòng)電泳系統(tǒng)使用體會(huì) （1郴州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科湖南郴州423000)(2威海衛(wèi)人民醫(yī)院山東威海264200;3中國(guó)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科100730）【中圖分類號(hào)】R197.39【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1672-5085（2012）2-0123-02【關(guān)鍵詞】免疫固定電泳SPIFE4000系統(tǒng)故障目前美國(guó)Helena公司推出了便捷的SPIFE4000全自動(dòng)電泳系統(tǒng)可進(jìn)行蛋白電泳、免疫固定電泳、同功酶電泳、脂蛋白電泳等檢測(cè)，現(xiàn)用該系統(tǒng)進(jìn)行免疫固定電泳，體會(huì)如下：1標(biāo)本留取免疫固定電泳的標(biāo)本可以是血標(biāo)本、尿液或腦脊液1（目前本儀器暫測(cè)血、尿標(biāo)本）。標(biāo)本量須2ml。血

2、標(biāo)本要求清晨空腹抽取靜脈血，及時(shí)分離血清，忌用溶血標(biāo)本及血漿標(biāo)本；尿標(biāo)本必須是清潔無(wú)污染，最好使用晨尿。2標(biāo)本保存標(biāo)本可在26保存72h2，在此條件下，對(duì)免疫球蛋白影響不大。若短期內(nèi)不進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，可在-20條件下保存1個(gè)月。避免反復(fù)凍融，使免疫球蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。3儀器的影響因素3.1儀器的設(shè)定與保養(yǎng)SPIFE4000系統(tǒng)分析免疫固定電泳(IFE)的過(guò)程是全自動(dòng)的過(guò)程。儀器自動(dòng)完成一系列操作，包括：加樣到加樣槽和瓊脂糖凝膠片、電泳、免疫固定、沖洗、染色、脫色和干燥凝膠、使用可見(jiàn)光光密度計(jì)掃描凝膠、顯示與打印結(jié)果等3。系統(tǒng)內(nèi)置了包含血清、尿蛋白電泳和免疫固定電泳的預(yù)設(shè)置編程參數(shù)。如果需要的話，終端

3、用戶可以更改這些電泳的參數(shù)設(shè)定，任意創(chuàng)建新的電泳程序，電泳條帶的長(zhǎng)度和寬度也可以調(diào)節(jié)。在通常情況下，我們采用廠家推薦的程序設(shè)置。每天工作后按說(shuō)明書對(duì)儀器進(jìn)行日，周，月保養(yǎng)，清理機(jī)內(nèi)廢物，清洗抗體板和樣品稀釋板（抗體板應(yīng)每24h清洗一次，然后用吐溫溶液泡十分鐘，晾干）。3.2試劑盒的使用使用美國(guó)Helena公司配套的血清免疫固定電泳試劑盒。試劑盒提供的凝膠片、點(diǎn)樣刀鋒、厚薄吸水紙、梳式吸水紙均為一次性的，可避免交叉污染。密封包裝的瓊脂糖凝膠膠片可在室溫下保存，水平放置，在實(shí)驗(yàn)前方可打開(kāi)包裝，確保膠片水份不丟失。抗體試劑必須在26冰箱保存，若抗體失效則不能使用。3.3儀器的準(zhǔn)備工作實(shí)驗(yàn)前必須按照操

4、作規(guī)程做好準(zhǔn)備工作，添加點(diǎn)樣刀鋒，厚薄吸水紙，（點(diǎn)樣刀鋒的正反面很關(guān)鍵，不能放反，否則儀器會(huì)報(bào)警）安裝干凈的抗體板，放置抗體試劑，關(guān)好各個(gè)艙門。檢查稀釋液，染液，洗液是否充足，廢液桶是否清空。然后運(yùn)行管道清洗。3.4實(shí)驗(yàn)前標(biāo)本的處理高濃度免疫球蛋白與抗體濃度不匹配，可造成抗原過(guò)量，過(guò)量的抗原能夠溶解凝膠中形成的抗原抗體復(fù)合物，形成中空的條帶。而且電泳區(qū)帶著色太深，不便于結(jié)果的分析。所以實(shí)驗(yàn)前應(yīng)調(diào)節(jié)免疫球蛋白的濃度，這是IFE最重要的前提。一般情況，結(jié)合血清蛋白電泳結(jié)果及歷史結(jié)果，對(duì)標(biāo)本稀釋倍數(shù)進(jìn)行判斷，正常標(biāo)本按蛋白固定（SP）泳道1:3稀釋，IgG、IgM、IgA、泳道各1：5稀釋。當(dāng)免疫球

5、蛋白的濃度超出正常范圍時(shí)，將該泳道標(biāo)本稀釋倍數(shù)進(jìn)行調(diào)整。該儀器具有自動(dòng)稀釋功能，從原倍到1：14之間多種可供選擇的稀釋倍數(shù)。注意調(diào)整了稀釋倍數(shù)的一組標(biāo)本不能和常規(guī)標(biāo)本放在一個(gè)傳送轉(zhuǎn)盤同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，應(yīng)該換盤進(jìn)行。標(biāo)本放置傳送轉(zhuǎn)盤時(shí)，注意標(biāo)本管的高度，及血清液面要高于轉(zhuǎn)盤面0.5ml。否則儀器會(huì)吸不到樣，或損壞吸樣針。3.5實(shí)驗(yàn)過(guò)程開(kāi)始實(shí)驗(yàn)時(shí)，將預(yù)吸干的凝膠片放入凝膠保濕器中。其中膠片的吸水過(guò)程非常關(guān)鍵，吸水時(shí)要受力均勻，不能重復(fù)吸水，吸水的好壞直接影響結(jié)果的好壞。一切準(zhǔn)備好后，按照程序開(kāi)始，儀器自動(dòng)完成整個(gè)電泳過(guò)程。若實(shí)驗(yàn)過(guò)程中有報(bào)警提示，及時(shí)處理。若因儀器中途故障而停止，需重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，可人為選

6、擇進(jìn)行未完成的步驟。4儀器常見(jiàn)故障及處理4.1出現(xiàn)Controland/orNDDCoutofrang報(bào)警，提示：質(zhì)控或NDDC超出范圍。報(bào)警原因：是電源波動(dòng)問(wèn)題。處理：檢查電源，與HelenaLaboratories公司聯(lián)系。4.2出現(xiàn)Nosampledispensingintosampletray報(bào)警，提示：沒(méi)有樣品分配到樣品槽中。報(bào)警原因：是去離子水瓶空、針堵塞、轉(zhuǎn)盤中無(wú)樣品、去離子水管中有氣泡、管或泵故障。處理：重新填注去離子水、清洗針、裝載轉(zhuǎn)盤、灌注儀器、替換泵頭。4.3出現(xiàn)Stainerleverdetectorfailures報(bào)警，提示：染色液液面檢測(cè)故障。報(bào)警原因：電氣故障、染

7、色槽沒(méi)有染色液。處理：確定染色液桶正確與儀器連接正常并且染色液桶中有染色液。4.4出現(xiàn)Electrophoresisgelhasrepeateddist她ortioninsamearea報(bào)警，提示：電泳凝膠多次在同一區(qū)域出現(xiàn)變形。報(bào)警原因：接觸薄板使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。處理：替換接觸薄板。4.5出現(xiàn)Gelappearsunacceptable報(bào)警，提示電泳后凝膠結(jié)果不好。報(bào)警原因：編程有問(wèn)題或試劑瓶有問(wèn)題。處理：對(duì)照用戶記錄的編程參數(shù)檢查檢測(cè)項(xiàng)目編程，如果參數(shù)更改，重新輸入?yún)?shù)；若編程沒(méi)問(wèn)題，檢查試劑瓶是否空了并重復(fù)檢測(cè)。5結(jié)果分析單克隆免疫球蛋白帶(M帶)是呈狹窄濃染且致密界限分明的沉淀帶，與血清蛋

8、白電泳(SPE)的M帶出于同一個(gè)水平位置，呈“鏡像式”的呼應(yīng)4。它可以是完整的免疫球蛋白分子如IgG、IgA、IgM、IgD，也可以是重鏈和輕鏈片段。6小結(jié)隨著技術(shù)的進(jìn)步，越來(lái)越多的單克隆免疫球蛋白（M蛋白）病被檢測(cè)出來(lái)，人們也逐漸重視對(duì)M蛋白的檢測(cè)，標(biāo)本量快速增加。目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都使用手工和半自動(dòng)電泳儀進(jìn)行IFE實(shí)驗(yàn)，即費(fèi)時(shí)又費(fèi)力，必然會(huì)逐漸被全自動(dòng)電泳儀取代。美國(guó)HelenaSPIFE4000全自動(dòng)免疫電泳系統(tǒng)使操作程序變得簡(jiǎn)單，凝膠片結(jié)果清晰易懂，準(zhǔn)確可靠；可批量進(jìn)行檢測(cè)，節(jié)省檢測(cè)時(shí)間和人力成本，方便臨床診斷;儀器易于保養(yǎng),故障率少；可以開(kāi)展多種電泳項(xiàng)目等優(yōu)點(diǎn)。完全適應(yīng)和滿足大醫(yī)院和?？漆t(yī)院的需要，值得推廣。參考文獻(xiàn)1朱國(guó)慶，姚宏靜.免疫固定電泳的應(yīng)用體會(huì)J.實(shí)用醫(yī)技雜志，2007，(12）:14-35.2楊莉萍，李東東，龔水明，陳少蓮.不同保存溫度和時(shí)間對(duì)血清免疫球蛋白含量的影響J.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，(2）：163-164.3耿紅蓮，王愛(ài)華，趙文靜，孔憲濤，仲人前.免疫固定電泳在多發(fā)性骨髓瘤患者實(shí)驗(yàn)室診斷中的應(yīng)用J.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，(24）1：76-78.4楊志才，高玉潔，張春明等.多發(fā)性骨髓瘤血清蛋白電泳與免疫學(xué)分J.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005，26(7)：3435.38. -全文完-