1,本章內(nèi)容概要：,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)用純水第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)用玻璃儀器第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法的選擇第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法的評(píng)價(jià)第五節(jié) 實(shí)驗(yàn)的診斷性能評(píng)價(jià),2,教學(xué)目的和要求：,1、掌握實(shí)驗(yàn)用純水的三級(jí)標(biāo)準(zhǔn)；實(shí)驗(yàn)方法的分級(jí)、標(biāo)準(zhǔn)品分級(jí)及相互之間的聯(lián)系；實(shí)驗(yàn)誤差的定義、分類和表示方法；方法評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)尤其是回收實(shí)驗(yàn)和干擾實(shí)驗(yàn)的原理和操作；診斷性能評(píng)價(jià)的指標(biāo)。,2、熟悉純水的制備方法；實(shí)驗(yàn)方法選擇的的原則和步驟；方法評(píng)價(jià)的基本內(nèi)容和步驟；方法評(píng)價(jià)的指標(biāo)；參考值和醫(yī)學(xué)決定水平的概念。,3、了解水的純度檢查；方法性能判斷的指標(biāo)；受試者工作曲線的應(yīng)用和用途。,3,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)用純水,天然水,自來水,實(shí)驗(yàn)用純水,經(jīng)簡(jiǎn)單的物理、化學(xué)方法處理，除去懸浮物質(zhì)和部分無機(jī)鹽,經(jīng)蒸餾、電滲析等處理，除去雜質(zhì),(懸浮物,膠體物質(zhì),溶解物質(zhì)),4,一、純水的制備方法,蒸餾法:,優(yōu)點(diǎn):設(shè)備簡(jiǎn)單,缺點(diǎn):1、揮發(fā)性物質(zhì)難以去除；2、耗能大，耗能水多； 3、需注意管道清潔,純度： 25時(shí)1105cm,如何安裝：,5,離子交換法：,氫型強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂(RSO3H，R為母體)，其中的H+與Ca2+、Na+等金屬離子發(fā)生交換反應(yīng)，而將鈣、鎂離子除去,氫氧型強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂(RNOH，R為母體)，其中的OH-與水中的CL-、碳酸根等陰離子發(fā)生交換反應(yīng)，而將它們除去：,6,優(yōu)點(diǎn): 除了可去除雜質(zhì)離子以外兼具吸附電中性雜質(zhì)和過濾顆粒雜質(zhì)的作用。,缺點(diǎn):,純度： 25時(shí)5106cm,2、由于離于交換為可逆反應(yīng)，故去離子水并非絕對(duì)不含離子,1、設(shè)備較復(fù)雜，成本較高；,7,電滲透法,在電場(chǎng)作用下水中各種陽離子趨向陰極，各種陰離子趨向陽極但陽離子只能透過陽膜而被相鄰的陰膜所阻，陰離子與此相反這樣，在一些隔間內(nèi)集中了陽離子和陰離子，即形成含鹽多的濃水，在另一些隔間內(nèi)由于陰、陽離子的遷出降低了含鹽量形成淡水,8,1、不需要消耗化學(xué)藥品，設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便。,消耗電能，當(dāng)原水中鹽濃度過低時(shí)，溶液電阻大，用電滲析也不經(jīng)濟(jì),純度:25時(shí)104105cm,2、對(duì)于含鹽量高的海水等用此法比用離子交換法更為經(jīng)濟(jì),優(yōu)點(diǎn):,缺點(diǎn):,9,炭吸附法:,活性炭是一種非常優(yōu)良的吸附劑，它是利用木炭、各種果殼和優(yōu)質(zhì)煤等作為原料，通過物理和化學(xué)方法對(duì)原料進(jìn)行破碎、過篩、催化劑活化、漂洗、烘干和篩選等一系列工序加工制造而成。,10,1、設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便。,純水制備效率低.,僅作為各種制備純水配套的一種措施.,2、它具有物理吸附和化學(xué)吸附的雙重特性,可以有選擇的吸附氣相、液相中的各種有機(jī)物質(zhì).,優(yōu)點(diǎn):,缺點(diǎn):,11,超濾膜法,特點(diǎn):僅能除去膠體細(xì)菌等大分子物質(zhì)和懸浮物,所得水還需進(jìn)一步純化.也是作為各種制備純水配套的一種措施.,12,混合純化系統(tǒng),醫(yī)用超純水設(shè)備,實(shí)驗(yàn)室純水系統(tǒng),櫥下式全自動(dòng)逆滲透純水機(jī),特點(diǎn):多種方法混合純化,可獲得純度很高的二級(jí)甚至一級(jí)純水.,13,二、水的純度檢查,用電導(dǎo)儀或兆歐表測(cè)定其電導(dǎo)率或電阻率,用特定試劑檢測(cè)水中殘留的Ca2+、Mg2+、CI-、SO42- 、硅酸鹽等成分的含量,微生物含量檢測(cè),單位：,電導(dǎo)：西門子（s）電導(dǎo)率： scm-1電阻：電阻率：cm,14,CAP:美國(guó)病理學(xué)家學(xué)會(huì),實(shí)驗(yàn)用純水標(biāo)準(zhǔn),15,NCCLS:美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì),16,級(jí)水:臨床實(shí)驗(yàn)室用水,一般實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn);級(jí)水:特殊實(shí)驗(yàn)如酶活性測(cè)定、電解質(zhì)分析等;級(jí)水:用做儀器、器皿的自來水清潔后沖洗.,實(shí)驗(yàn)用純水的用途,17,實(shí)驗(yàn)用純水的貯存、運(yùn)輸和使用:,一般選用聚乙烯或聚丙烯桶（瓶）貯存，貯存時(shí)間不宜太長(zhǎng)，使用時(shí)應(yīng)避免一切可能的污染，切勿用手接觸純水或容器內(nèi)壁.,盛裝藥品,試劑,18,第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)用玻璃儀器(了解),19,第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法的選擇,選擇準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)方法,為臨床提供準(zhǔn)確可靠的信息,臨床生化檢驗(yàn)分析,實(shí)驗(yàn)方法選擇的目的實(shí)驗(yàn)方法的分級(jí) 標(biāo)準(zhǔn)試劑的分級(jí),保證,20,一、實(shí)驗(yàn)方法選擇的目的,根本目的：各實(shí)驗(yàn)室按照方法選擇的原則結(jié)合自身?xiàng)l件，確定合適的某項(xiàng)目的檢測(cè)方法。保證擬使用的檢測(cè)方法在正式應(yīng)用于臨床分析病人標(biāo)本之前，對(duì)方法性能及可能引入的誤差進(jìn)行了解，作出初步評(píng)估。,21,二、實(shí)驗(yàn)方法的分級(jí),分級(jí)依據(jù)：IFCC根據(jù)分析方法的準(zhǔn)確性與精密度的不同。,決定性方法 參考方法 常規(guī)方法,分為三級(jí)：,22,（一）決定性方法definitive method,定義： 是指準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳細(xì)的研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法，其測(cè)定結(jié)果與真值最為接近。,主要方法：,重量分析法、中子活化法、同位素稀釋-質(zhì)譜分析法（ID-MS）,23,應(yīng)用： 由于技術(shù)要求太高，費(fèi)用昂貴，這類方法不直接用于鑒定常規(guī)方法的準(zhǔn)確性，只用于評(píng)價(jià)參考方法與一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品。,儲(chǔ)氫重量分析儀 (北京英格海德分析技術(shù)有限公司),24,（二）參考方法reference method,定義： 是指準(zhǔn)確度與精密度已經(jīng)被充分證實(shí)，且經(jīng)公認(rèn)的權(quán)威機(jī)構(gòu)（國(guó)家主管部門、相關(guān)學(xué)術(shù)團(tuán)體和國(guó)際性組織等）頒布的方法。這類方法干擾因素少，系統(tǒng)誤差很小，有適當(dāng)?shù)撵`敏度、特異度、較寬的分析范圍并且線性良好，重復(fù)測(cè)定中的隨機(jī)誤差可以忽略不計(jì)。,主要方法：,原子吸收分光光度法、火焰光度法、免疫化學(xué)法，離子交換層析法等,25,應(yīng)用： 能在條件優(yōu)越的實(shí)驗(yàn)室作常規(guī)分析，主要用于鑒定常規(guī)方法，評(píng)價(jià)其誤差大小、干擾因素并決定是否可以被接受；用于鑒定二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品和為質(zhì)控血清定值；用于商品試劑盒的質(zhì)量評(píng)價(jià)。,26,（三）常規(guī)方法（routine method ）,定義： 應(yīng)具有足夠的精密度、準(zhǔn)確度和特異度，有適當(dāng)?shù)姆治龇秶?jīng)濟(jì)實(shí)用，其性能指標(biāo)符合臨床或其它目的的需要。,主要方法： 溴甲酚綠法、雙縮脲法、J-G法等。,應(yīng)用： 臨床常規(guī)檢驗(yàn)使用，常規(guī)方法在作出評(píng)定以后，經(jīng)有關(guān)學(xué)術(shù)組織認(rèn)可，可以作為推薦方法（recommended method ） 。,偏差已知方法,偏離未知方法,27,28,三、標(biāo)準(zhǔn)試劑的分級(jí),標(biāo)準(zhǔn)試劑（標(biāo)準(zhǔn)品）的定義：,國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)將標(biāo)準(zhǔn)品（參考物， reference material）的定義暫定為：它的一種或幾種物理或化學(xué)性質(zhì)已經(jīng)充分確定；被用于校正儀器或用于評(píng)價(jià)一種測(cè)定方法的物質(zhì)，并將其分成三級(jí)。,標(biāo)準(zhǔn)品的應(yīng)用：,方法評(píng)價(jià)、儀器校正、常規(guī)分析的質(zhì)量控制,29,標(biāo)準(zhǔn)品的分級(jí)：,一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品 二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品 控制物,30,（一）一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品（原級(jí)參考物）,定義： 是已經(jīng)確定的穩(wěn)定而均一的物質(zhì)，其數(shù)值已由決定性方法確定或由高度準(zhǔn)確的若干方法確定，所含雜質(zhì)已經(jīng)定量。,應(yīng)用： 用于校正決定性方法，評(píng)價(jià)和校正參考方法以及為“二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品”定值。,31,（二）二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品（次級(jí)參考物）,定義： 這類標(biāo)準(zhǔn)品可以是純?nèi)芤海ㄋ蛴袡C(jī)溶劑的溶液），也可以存在于相似基質(zhì)中。可由實(shí)驗(yàn)室自己配制或?yàn)樯唐?，其中有關(guān)物質(zhì)的量由參考方法定值或用一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品比較而確定。,應(yīng)用： 主要用于常規(guī)方法的標(biāo)化和控制物的定值。,32,（三）控制物（質(zhì)控物）,用二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品和常規(guī)方法測(cè)定，用于常規(guī)質(zhì)量控制，以控制病人標(biāo)本的測(cè)定誤差?？刂莆锊荒苡糜跇?biāo)定儀器或方法。,定值血清：在發(fā)生問題時(shí)查找原因,未定值血清：一般情況下使用,另：用二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品和常規(guī)方法測(cè)定，然后定值經(jīng)過修正后得到校準(zhǔn)品。,33,決定性方法 一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品參考方法 二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品常規(guī)方法 控制物,34,四、實(shí)驗(yàn)方法選擇的原則,總原則： 從實(shí)際出發(fā)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的條件和檢測(cè)要求確定適當(dāng)?shù)姆椒ā?條件優(yōu)越的實(shí)驗(yàn)室：參考方法,一般臨床化學(xué)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室：常規(guī)方法或使用方便的參考方法,35,盡量選用國(guó)內(nèi)外通用方法或推薦方法，便于方法的規(guī)范化和質(zhì)量控制，重點(diǎn)考慮實(shí)用性和可靠性。,常規(guī)方法選擇時(shí)的原則：,36,（一）實(shí)用性,微量快速、方法簡(jiǎn)便、安全可靠、成本低廉,（二）可靠性,所選方法具有較高的精密度、準(zhǔn)確度和較大的檢測(cè)能力，保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性能滿足方法允許誤差限度的要求。,標(biāo)本l、試劑ml,37,五、實(shí)驗(yàn)方法選擇的步驟,（一）廣泛查閱文獻(xiàn)：,（二）選定侯選方法：全面認(rèn)識(shí)該法。,（三）侯選方法的初步試驗(yàn)：,根據(jù)方法選擇的要求，比較各種方法,38,初步試驗(yàn)包括：簡(jiǎn)單 標(biāo)準(zhǔn)曲線和重復(fù)性 質(zhì)控血清和新鮮標(biāo)本的重復(fù)實(shí)驗(yàn) 析濃度不同的標(biāo)本，并與公認(rèn)的參考方法的結(jié)果對(duì)比.,初步試驗(yàn)?zāi)康? 使工作者熟悉有關(guān)技術(shù),掌握各分析步驟要點(diǎn),判斷能否適合本室條件要求.根據(jù)所獲得的資料確定是否有必要作進(jìn)一步研究。,初步試驗(yàn),39,第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法的評(píng)價(jià),初步試驗(yàn),判斷符合實(shí)驗(yàn)要求,系統(tǒng)評(píng)價(jià),決定該方法是否可接受,分析評(píng)價(jià)試驗(yàn)測(cè)得結(jié)果和比較方法性能判斷的標(biāo)準(zhǔn),實(shí)驗(yàn)方法系統(tǒng)評(píng)價(jià)的過程:對(duì)實(shí)驗(yàn)誤差的測(cè)定,40,一、實(shí)驗(yàn)誤差,定義:指量值的給出值與其客觀真值之差.,(一)實(shí)驗(yàn)誤差的分類:依據(jù)來源性質(zhì),實(shí)驗(yàn)誤差,系統(tǒng)誤差 SE,隨機(jī)誤差 RE,恒定系統(tǒng)誤差 CE,比例系統(tǒng)誤差 PE,廣泛性,不可求,另：粗大誤差,41,系統(tǒng)誤差（systematic error， SE）,定義:指一系列測(cè)定值對(duì)真值存在同一傾向的偏差。,特點(diǎn):具有單向性，而沒有隨機(jī)性，常有一定的大小和方向； 一般由恒定的因素引起，并在一定條件下多次測(cè)定中重復(fù)出現(xiàn)；當(dāng)找到引起誤差的原因，采取一定措施即可糾正，消除系統(tǒng)誤差能提高測(cè)定的準(zhǔn)確度。,42,分類: CE：指由干擾物引起的使測(cè)定值與真值存在恒定大小的誤差，誤差大小與被測(cè)物濃度無關(guān)，而與干擾物濃度相關(guān)。 PE：指相對(duì)于被測(cè)物濃度有相同的百分比誤差，誤差的絕對(duì)量與被測(cè)物濃度成正比。,引起誤差的原因： 方法誤差：最嚴(yán)重，最難避免； 儀器和試劑誤差：可以采取措施避免。,43,隨機(jī)誤差（random error，RE）,特點(diǎn):誤差沒有一定的大小和方向，可正可負(fù)，數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布； 具有不可預(yù)測(cè)性，不可避兔，但可控制在一定范圍內(nèi)； 當(dāng)分析步驟越多，造成種誤差的機(jī)會(huì)越多； 隨測(cè)定次數(shù)增加，其算術(shù)均數(shù)就越接近于真值。,定義:指在實(shí)際工作中，多次重復(fù)測(cè)定某一物質(zhì)時(shí)引起的誤差。,44,由測(cè)定儀器、試劑、環(huán)境等實(shí)驗(yàn)條件的改變以及分析人員操作習(xí)慣等因素的變化而引起。,系統(tǒng)誤差,隨機(jī)誤差,引起誤差的原因,引起誤差的原因：,45,(二)實(shí)驗(yàn)誤差的表示方法：,平均誤差：算術(shù)平均偏差，用dm表示,標(biāo)準(zhǔn)偏差（標(biāo)準(zhǔn)差）：表示精密度的較好的指標(biāo)。,絕對(duì)誤差和絕對(duì)偏差：,dm=di/n=X- /n,di2,=,N-1,絕對(duì)誤差=X-T,絕對(duì)偏差=X-X,46,相對(duì)誤差和相對(duì)偏差：,變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）,相對(duì)誤差=,X-T,T,100%,相對(duì)偏差=,X-X,X,100%,CV=,S,X,100,比較各組數(shù)據(jù)間的變異情況,CV 離散度 精密度,47,48,二、方法評(píng)價(jià)的基本內(nèi)容和步驟,(一)方法評(píng)價(jià)的基本內(nèi)容,基本內(nèi)容:通過實(shí)驗(yàn)途徑，測(cè)定并評(píng)價(jià)方法的精密度和準(zhǔn)確度。,評(píng)價(jià)試驗(yàn)的過程:就是對(duì)誤差的測(cè)定。,精密度和準(zhǔn)確度,誤差,方法評(píng)價(jià)指標(biāo)不可直接測(cè)定,實(shí)際測(cè)定可直接測(cè)定,方法評(píng)價(jià)試驗(yàn),49,(二)方法評(píng)價(jià)步驟,評(píng)價(jià)前實(shí)驗(yàn):研究候選方法的最適條件。 初步評(píng)價(jià):批內(nèi)和日內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)、回收試驗(yàn)、干擾試驗(yàn) 最后評(píng)價(jià):依順序作日間重復(fù)性試驗(yàn)，方法比較試驗(yàn)和總體判斷方法是否可接受 。評(píng)價(jià)后實(shí)驗(yàn):如方法可接受，則進(jìn)行臨床相關(guān)研究.方法應(yīng)用:建立質(zhì)控系統(tǒng)，培訓(xùn)操作者，引人常規(guī)工作等 。,隨機(jī)誤差,系統(tǒng)誤差,方法性能判斷,診斷學(xué)評(píng)價(jià),50,三、方法評(píng)價(jià)指標(biāo),精密度、準(zhǔn)確度、特異度和干擾以及檢測(cè)能力等,（一）精密度（Precision）,定義:表示測(cè)定結(jié)果中隨機(jī)誤差大小程度的指標(biāo)。它表示同一標(biāo)本在一定條件下多次重復(fù)測(cè)定所得到的一系列單次測(cè)定值的符合程度。,表示方法:自身無量度指標(biāo)，常用標(biāo)準(zhǔn)差（S）或變異系數(shù)（CV）表示。,（n，X）,（n，X）,51,分類：,連續(xù)測(cè)定的精密度 重復(fù)性精密度 （了解）再現(xiàn)性精密度 （了解）,52,連續(xù)測(cè)定的精密度：,在相同條件下，對(duì)同一標(biāo)本連續(xù)進(jìn)行n次重復(fù)測(cè)定結(jié)果的符合程度。在有限次測(cè)定情況下，一般用 （總體標(biāo)準(zhǔn)差）的估計(jì)值S（樣本標(biāo)準(zhǔn)差）來表達(dá)這種精密度。,定義：,53,重復(fù)性精密度：,又稱室（批）內(nèi)精密度，指在相同條件下（同樣方法、同一種試劑和標(biāo)準(zhǔn)品、同樣儀器、在同一實(shí)驗(yàn)室由同一人操作，并要保持實(shí)驗(yàn)期間準(zhǔn)確性不變）對(duì)同一標(biāo)本在盡可能短的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行m輪n次重復(fù)測(cè)定結(jié)果之間相互接近的程度。重復(fù)性（批內(nèi)）精密度（S）,Si2,m,S=,Si,=,(xt-xt)2,n-1,CV=,S,X,100,定義：,54,再現(xiàn)性精密度,定義： 又稱室（批）間精密度，指在不同條件下（不同操作者，用不同儀器，在不同實(shí)驗(yàn)室和不同時(shí)間）采用同一方法對(duì)同一標(biāo)本所獲得的單次測(cè)定結(jié)果之間彼此符合程度。,應(yīng)用：多用于實(shí)驗(yàn)室間的質(zhì)量估計(jì)，其標(biāo)準(zhǔn)差常稱為室間標(biāo)準(zhǔn)差。室（批）間標(biāo)準(zhǔn)差，是在對(duì)室（批）間重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行單因素完全隨機(jī)設(shè)計(jì)方差分析后進(jìn)行計(jì)算。,55,（二）準(zhǔn)確度：,定義: 指測(cè)定結(jié)果與真值接近的程度，一般用偏差和偏差系數(shù)表示。,表示方法: 偏差為重復(fù)測(cè)定均值（ X）與真值之差。 偏差系數(shù)（CB）= 100 。,真值-X,真值,定量的標(biāo)準(zhǔn)品,確認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)方法,或,56,影響因素：系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差（了解）,表示已定系統(tǒng)誤差的綜合。,A=+（不確定度）,不確定度（uncertainty）是表達(dá)測(cè)定結(jié)果的一個(gè)組成部分，它表明被測(cè)標(biāo)本中真值存在的范圍,57,（三）特異度和干擾,即專一性，是指在特定實(shí)驗(yàn)條件下分析試劑只對(duì)待測(cè)物質(zhì)起反應(yīng)，而不與其它結(jié)構(gòu)相似的非被測(cè)物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。分析方法特異度越高，則測(cè)定結(jié)果越準(zhǔn)確。,特異度（specificity）,是指標(biāo)本中某些非被測(cè)物質(zhì)本身不與分析試劑反應(yīng)但以其它形式使待測(cè)物測(cè)定值偏高或偏低，這些非被測(cè)物質(zhì)稱為干擾物。,干擾（interference）,特異度,干擾,方法的準(zhǔn)確性,側(cè)面指標(biāo),正面指標(biāo),58,（四）檢測(cè)能力,定義：即檢測(cè)限度或檢出限（detection limit），是指能與適當(dāng)?shù)摹翱瞻住弊x數(shù)相區(qū)別的待測(cè)物的最小值。,空白讀數(shù)： 指由基質(zhì)、試劑所得的讀數(shù)和結(jié)果，以及由儀器或測(cè)定過程所產(chǎn)生的影響測(cè)定步驟的殘余偏差。,試劑空白：試劑+D.W,檢出限,T,T,T B,59,四、評(píng)價(jià)試驗(yàn),評(píng)價(jià)試驗(yàn)包括重復(fù)性試驗(yàn)回收試驗(yàn)于擾試驗(yàn)方法比較試驗(yàn),60,（一）重復(fù)性試驗(yàn),試驗(yàn)的目的:,試驗(yàn)的方法:,對(duì)同一材料（標(biāo)準(zhǔn)液、質(zhì)控液、標(biāo)本等）分成數(shù)份試驗(yàn)標(biāo)本進(jìn)行多次分析測(cè)定，并計(jì)算其均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差與變異系數(shù)。,檢測(cè)候選方法的隨機(jī)誤差,（1）批內(nèi):標(biāo)準(zhǔn)液 （2）日內(nèi): （3）日間:質(zhì)控液 （4）平行雙份:,試驗(yàn)的形式:,應(yīng)注意的問題:,（1）分析標(biāo)本選擇,（2）被測(cè)物濃度,61,(二)回收試驗(yàn),試驗(yàn)的目的:,試驗(yàn)的方法:,將被測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)液加人病人標(biāo)本中，成為分析標(biāo)本；原病人標(biāo)本中加人等量的無被測(cè)物的溶劑作基礎(chǔ)標(biāo)本；然后用候選方法測(cè)定并得到各自濃度。,檢測(cè)候選方法的比例系統(tǒng)誤差。,回收:指候選方法準(zhǔn)確測(cè)定加入常規(guī)分析標(biāo)本的純分析物的能力。,62,回收濃度=分析標(biāo)本測(cè)得濃度 - 基礎(chǔ)標(biāo)本測(cè)得濃度（實(shí)際測(cè)得值）,計(jì)算:,加入濃度=,標(biāo)準(zhǔn)液量,病人樣品量（ml）標(biāo)準(zhǔn)液量（ml）,標(biāo)準(zhǔn)液濃度（理論真實(shí)值）,回收率（%）=,回收濃度,加入濃度,100（理想值為）,63,注意事項(xiàng)：吸量準(zhǔn)確；加入標(biāo)準(zhǔn)液后，其實(shí)驗(yàn)樣品的被子測(cè)濃度最好達(dá)到醫(yī)學(xué)決定水平；總濃度必須在方法分析范圍內(nèi)；需加入高中低不同濃度回收試驗(yàn)，計(jì)算平均回收率；加入標(biāo)準(zhǔn)液的體積一般在10%內(nèi)；重復(fù)2-3次。,64,(三)干擾試驗(yàn),試驗(yàn)的目的:,用來檢測(cè)候選方法的恒定系統(tǒng)誤差。干擾物濃度不同，誤差大小也不同,干擾:,指標(biāo)本中某些非被測(cè)物質(zhì)本身不與分析試劑反應(yīng)但以其它形式使待測(cè)物測(cè)定值偏高或偏低。,65,試驗(yàn)的方法:,基本與回收試驗(yàn)一樣，但在病人標(biāo)本中加人的是疑有干擾或非特異性反應(yīng)的物質(zhì)。將可能引起干擾的物質(zhì)配成一定濃度的溶液，加到病人標(biāo)本中成為干擾分析樣本；原病人標(biāo)本加人相同量的無干擾物質(zhì)的溶劑作為基礎(chǔ)樣本；然后用候選方法對(duì)此兩種樣本同時(shí)測(cè)定，兩者之差即表示該干擾物質(zhì)產(chǎn)生的干擾所引起的誤差，即干擾值,干擾值=分析標(biāo)本測(cè)得濃度 - 基礎(chǔ)標(biāo)本測(cè)得濃度,計(jì)算:,66,67,(四)方法比較試驗(yàn)（對(duì)比試驗(yàn)）（熟悉）,試驗(yàn)的目的:,試驗(yàn)的方法:,對(duì)一組病人的標(biāo)本用候選方法和比較方法同時(shí)進(jìn)行分析測(cè)定，觀察二者之間的差異。這是考驗(yàn)候選方法是否可采用的重要措施。,用于檢測(cè)候選方法的系統(tǒng)分析誤差。對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，可提供系統(tǒng)誤差的性質(zhì)（恒定或和比例誤差）,68,在進(jìn)行臨床化學(xué)常規(guī)方法的評(píng)價(jià)時(shí)，最好選擇參考方法作為比較方法若采用已知偏差法，則有部分誤差來自比較方法（與已知偏差 一致的那部分誤差），剩余的則屬于侯選方法。若采用未知偏差法，分析誤差可能來源于二者之一或兩者都有，難以分析。,比較方法的選擇：,應(yīng)注意的問題:,統(tǒng)計(jì)處理：配對(duì)t檢驗(yàn)、相關(guān)和回歸分析。,69,方法學(xué)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)小結(jié),重復(fù)性試驗(yàn)：測(cè)定候選方法的偶然誤差，衡量精密度?；厥赵囼?yàn)：測(cè)定比例系統(tǒng)誤差，衡量準(zhǔn)確度。干擾試驗(yàn)：測(cè)定恒定系統(tǒng)誤差，衡量準(zhǔn)確度。方法對(duì)比試驗(yàn)：檢測(cè)候選方法的系統(tǒng)分析誤差。,70,五、方法性能判斷,方法的選擇,方法的評(píng)價(jià),實(shí)驗(yàn)的診斷性能評(píng)價(jià),方法性能判斷,建立質(zhì)控,引入常規(guī)檢驗(yàn),實(shí)驗(yàn)誤差,某一確定的允許誤差,某一確定的允許誤差,方法性能標(biāo)準(zhǔn)(PS):運(yùn)用統(tǒng)計(jì)方法制定出一系列醫(yī)學(xué)決定水平上的標(biāo)本允許誤差限度,71,（一）方法學(xué)性能指標(biāo)：,、允許分析誤差：依據(jù)Westgard制定的標(biāo)本的允許誤差限度，或者的病人標(biāo)本其誤差應(yīng)小于這個(gè)限度，用表示。 是大量研究,運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法制定出的。,、醫(yī)學(xué)決定水平：對(duì)臨床病人的診療具有醫(yī)學(xué)判斷作用的臨界分析物濃度，用c表示。c代表一個(gè)閾值。每個(gè)檢測(cè)指標(biāo)有一個(gè)或多個(gè)閾值。,性能指標(biāo):和c組成某方法的性能指標(biāo)。即某方法在一定XC下的值。,72,制定性能標(biāo)準(zhǔn)，要反映臨床應(yīng)用與解釋結(jié)果的要求（醫(yī)學(xué)效用限度），又要基本符合實(shí)驗(yàn)室所能做到的技能狀態(tài)。,方法學(xué)性能標(biāo)準(zhǔn)制定原則,73,（二）方法性能判斷指標(biāo)：,判斷標(biāo)準(zhǔn)：,各種誤差值,確定的允許誤差值：方法可以接受,任何一項(xiàng)各種誤差值,確定的允許誤差值：方法不能接受,性能判斷指標(biāo)：兩套（了解）,第一套：?jiǎn)沃蹬袛嘀笜?biāo)：簡(jiǎn)單，用于初步估量,第二套：可信區(qū)間判斷指標(biāo)：復(fù)雜，對(duì)方法性能評(píng)價(jià)更客觀，用于最后判斷,74,、單值判斷指標(biāo),誤差類別 判斷指標(biāo) 備注隨機(jī)誤差（RE） 1.96STMEA STM=重復(fù)試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)差 比例誤差（PE）(|R-100|)(XC/100)EA R=平均回收率恒定誤差(CE) |偏差|EA 由干擾試驗(yàn)測(cè)出系統(tǒng)誤差(SE) |(a+bXc)-Xc|EA 對(duì)比試驗(yàn)回歸方程總誤差(TE) RE+SEEA 包括偶然及系統(tǒng)誤差,75,（）可信區(qū)間、可信上限和可信下限：,統(tǒng)計(jì)學(xué)的規(guī)律說明，每種測(cè)定結(jié)果的可靠性與測(cè)定次數(shù)有關(guān)，次數(shù)愈多，結(jié)果反映真實(shí)性愈強(qiáng)；但實(shí)際上，不可能進(jìn)行大量的測(cè)定。,在統(tǒng)計(jì)學(xué)中為了估量分析誤差的不確定性，對(duì)于每一誤差可計(jì)算其可信區(qū)間，用可信上限與可信下限代替單值的估量，u為誤差的可信上限，l為誤差的可信下限。west-gard推薦用90的可信區(qū)間，這樣，u將是誤差單側(cè)的95上限，用此判斷候選方法的可接受性比較可靠。,76,假如，u EA ，則方法性能為可接受；假如l EA，則方法必須改進(jìn)，以減少誤差，否則排除。假如u EA ，但l EA ，說明僅有的數(shù)據(jù)不足以作出任何有關(guān)可接受性的結(jié)論，還需繼續(xù)實(shí)驗(yàn)以收集更多的數(shù)據(jù)，以便對(duì)分析誤差作出較好的估量,77,、可信區(qū)間判斷指標(biāo)計(jì)算公式：,誤差類別 實(shí)驗(yàn) 接受指標(biāo)EUEA隨機(jī)誤差 重復(fù)性 1.96STMUEA比例誤差 回收 |RU或L-100|U (XC /100)EA*恒定誤差 干擾 |d|+t(sd)/NUEA* 系統(tǒng)誤差 對(duì)比 | (a+bXcW)-XC| UEA*總誤差 重復(fù)性和 (1.96STMU)2+W2 (1.96STML)2+W2 方法對(duì)比 +|a+bXc)-XC|EA#*特例:當(dāng)RU100RL,PEL=0 *特例:當(dāng)t(sd)/NL/偏差/,CEL=0*特例:當(dāng)(a+bXc+W)XC (a+bXc-W),CEL=0# 特例:當(dāng)SEL=0,TEL=REL,78,內(nèi)容原理、試劑配制、所用器材、操作步驟等結(jié)論可接受或不被接受后期工作評(píng)價(jià)后實(shí)驗(yàn)和應(yīng)用階段。,（三）評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)書面報(bào)告,79,第五節(jié) 實(shí)驗(yàn)的診斷性能評(píng)價(jià),方法的選擇,方法的評(píng)價(jià),實(shí)驗(yàn)的診斷性能評(píng)價(jià),方法性能判斷,建立質(zhì)控,引入常規(guī)檢驗(yàn),方法學(xué)評(píng)價(jià),診斷學(xué)評(píng)價(jià),臨床診斷,實(shí)驗(yàn)室,80,診斷性能評(píng)價(jià)：,與臨床診斷相結(jié)合，建立參考值，采用臨床評(píng)價(jià)標(biāo)診斷靈敏度、診斷特異度、預(yù)測(cè)值、似然比等作進(jìn)一步評(píng)價(jià)。,與檢測(cè)方法的靈敏度、特異度相區(qū)別,81,一、參考值和醫(yī)學(xué)決定水平,（一）參考值和參考范圍,正常值和正常值范圍,參考值和參考范圍,某地區(qū)選定一群健康人采用標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定某項(xiàng)目，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法處理求出和,為正常值,2S為正常值范圍,參考個(gè)體（預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)個(gè)體） 參考人群 參考標(biāo)本 參考值（） 將病人 標(biāo)本 參考分布（正態(tài)或偏態(tài)） 的結(jié)果 與之 參考限（計(jì)算S） 對(duì)照 參考區(qū)間（2S）,？,注意事項(xiàng)：對(duì)象條件數(shù)量方法,82,（二）醫(yī)學(xué)決定水平,定義：對(duì)臨床診治疾病具有決定性作用的被分析物質(zhì)的濃度，是臨床上按照不同病情給予不同治療方案而確定的閾值。,作用：,、判斷被檢對(duì)象有病或完全排除被檢對(duì)象有病。、確定診斷試驗(yàn)在不同病情時(shí)的變化，需要有治療及判斷預(yù)后的界值。,DL3,83,水平：提示需要進(jìn)一步檢查的閾值 水平：提示需要治療措施的界點(diǎn) 水平：提出預(yù)后或要緊急處理的界值,一個(gè)診斷試驗(yàn)一般確定三個(gè)決定水平：,臨床生化檢驗(yàn)指標(biāo)的醫(yī)學(xué)決定水平,84,二、診斷靈敏度、特異度、預(yù)測(cè)值和似然比,（一）診斷試驗(yàn)和金標(biāo)準(zhǔn),定義診斷試驗(yàn)：指一般臨床實(shí)驗(yàn)檢查方法，費(fèi)用低、操作簡(jiǎn)單，對(duì)病人無損害，快速等優(yōu)點(diǎn)。,金標(biāo)準(zhǔn)：通過活檢、尸檢、外科手術(shù)、隨訪等所作出的決定性診斷。,85,診斷試驗(yàn)和金標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用：,診斷試驗(yàn),金標(biāo)準(zhǔn),臨床上診斷：,提供病人患病的可能性,金標(biāo)準(zhǔn),診斷試驗(yàn),診斷結(jié)果為患者和非患者,診斷性試驗(yàn)的評(píng)價(jià)：,診斷結(jié)果為患者和非患者,測(cè)得其陰性或陽性結(jié)果,拿不準(zhǔn),進(jìn)行各種分析,86,診斷試驗(yàn)結(jié)果和患病的關(guān)系：,87,（二）診斷敏感度（真陽性率）：臨床診斷+診斷實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)（三）診斷特異度（真陰性率）：臨床診斷+診斷實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)（四）診斷準(zhǔn)確度（診斷效率）：臨床診斷+診斷實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)三、受試者工作曲線：受試者工作曲線的應(yīng)用： 1、選擇合適的閾值；2、比較兩個(gè)診斷同種疾病的試驗(yàn)。,88,（五）預(yù)測(cè)值：臨床診斷 另流行率（六）似然比：臨床診斷+診斷實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià) 另：試驗(yàn)后患病可能性：PTL（七）診斷試驗(yàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)的應(yīng)用：閾值,