《植物生理學-過氧化氫酶的活性的測定(共2頁).doc》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《植物生理學-過氧化氫酶的活性的測定(共2頁).doc（2頁珍藏版）》請在匯文網(wǎng)上搜索。

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上過氧化氫酶的活性的測定紫外線吸收法一、原 理 H2O2在240nm波長下有強烈吸收，過氧化氫酶能分解過氧化氫，使反應溶液吸光度（A240）隨反應時間而降低。根據(jù)測量率的變化速率即可測出過氧化氫酶的活性。二、材料與設備 植物材料：植物的葉 實驗材料：紫光分光光度計、離心機、研缽、250ml容量瓶、0.5ml吸管1支、10ml試管1支 試劑：0.2mol/LpH7.8磷酸緩沖液 0.1mol/ H2O2（用0.1mol/L高錳酸鉀標定）三、操作步驟 1、酶提取液：稱取葉片0.5g置于研缽中，加入pH7.0的磷酸緩沖液研磨成為勻漿，并用緩沖溶液清洗研缽數(shù)次（共用6ml磷酸緩

2、沖液，緩沖液分幾次加入），取上部澄清液在4000rpm下離心15min，上清液即為過氧化氫酶粗提液。保存?zhèn)溆谩?2、測定：取10ml試管1支，按表20-2順序加入試劑。紫外線吸收法測定H2O2樣品配置表管號S1粗酶液0.2pH7.8磷酸1.5蒸餾水1.0在管中加入0.3ml0.1mol/L的H2O2，加完后立即計時，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下測定吸光度，每隔一分鐘讀數(shù)一次，共測三分鐘，測完后，按下式計算酶活性。四、結果計算以1min內(nèi)減少0.1的酶量為一個酶活單位（u） A240×VT 過氧化氫酶活性（u/gFW/min）=0.1×V×t×FW =0.043×4.6÷0.1÷0.2÷0.3÷3 =10.99五、實驗反思 1、影響過氧化氫酶活性測定的因素有哪些？過氧化氫酶提取自植物的新鮮葉片中，新葉與舊葉的酶活性存在差異，所以葉片的選擇會影響酶活性的測定。 溫度的變化也會引起酶活性的測定 研磨是否充分，洗滌是否洗干凈也會影響。2、實驗測得的吸光度較?。ㄎ舛鹊钠鹗贾递^低），酶活性較小，可能是選取的葉片較老，實驗中的失誤，用滴定管滴定時，滴定的蒸餾水超過了1ml，造成了過氧化氫酶的濃度偏低，用紫外線吸收法測定時造成吸光度值偏低。專心-專注-專業(yè)