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1、腫瘤靶向治療分子標(biāo)靶應(yīng)用進(jìn)展腫瘤靶向治療分子標(biāo)靶應(yīng)用進(jìn)展 馮德云馮德云背景資料背景資料20世紀(jì)世紀(jì)70年代前年代前:v腫瘤生物學(xué)研究：細(xì)胞和亞細(xì)胞水平腫瘤生物學(xué)研究：細(xì)胞和亞細(xì)胞水平 腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)失控而處在不斷的周期性分腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)失控而處在不斷的周期性分裂中裂中,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞分裂速度加快。導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞分裂速度加快。v傳統(tǒng)化療藥：針對(duì)阻斷有絲分裂中微管蛋白傳統(tǒng)化療藥：針對(duì)阻斷有絲分裂中微管蛋白形成的細(xì)胞毒性藥物和破壞形成的細(xì)胞毒性藥物和破壞DNA合成的抗代合成的抗代謝藥物謝藥物 抗瘤譜較廣，選擇性不強(qiáng)，效果差別很大抗瘤譜較廣，選擇性不強(qiáng)，效果差別很大同時(shí)損害正常細(xì)胞，有嚴(yán)重不良反應(yīng)同時(shí)損害正常

2、細(xì)胞，有嚴(yán)重不良反應(yīng)20世紀(jì)世紀(jì)70年代后年代后:v腫瘤生物學(xué)研究：分子水平腫瘤生物學(xué)研究：分子水平 腫瘤中癌基因擴(kuò)增而激活，抑癌基因突變失腫瘤中癌基因擴(kuò)增而激活，抑癌基因突變失活或丟失，基因轉(zhuǎn)錄和蛋白產(chǎn)物異常，信號(hào)轉(zhuǎn)活或丟失，基因轉(zhuǎn)錄和蛋白產(chǎn)物異常，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異?；罨?，細(xì)胞周期調(diào)節(jié)失控，導(dǎo)致腫導(dǎo)通路異?；罨?，細(xì)胞周期調(diào)節(jié)失控，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞不受控制地增殖，細(xì)胞凋亡抑制，腫瘤瘤細(xì)胞不受控制地增殖，細(xì)胞凋亡抑制，腫瘤新生血管形成。新生血管形成。v腫瘤分子生物學(xué)研究闡明了腫瘤發(fā)生發(fā)展中的腫瘤分子生物學(xué)研究闡明了腫瘤發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制，為腫瘤藥物治療提供了一種新的模分子機(jī)制，為腫瘤藥物治療提供了一

3、種新的模式。式。腫瘤的靶向治療腫瘤的靶向治療targeted therapyv依據(jù)已知腫瘤發(fā)生發(fā)展中涉及的異常依據(jù)已知腫瘤發(fā)生發(fā)展中涉及的異常分子和基因，設(shè)計(jì)和研制針對(duì)這些已分子和基因，設(shè)計(jì)和研制針對(duì)這些已知的特定分子和基因靶點(diǎn)的藥物，選知的特定分子和基因靶點(diǎn)的藥物，選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞的治療方法。擇性殺傷腫瘤細(xì)胞的治療方法。v靶向藥物只作用于特定靶點(diǎn)的腫瘤，靶向藥物只作用于特定靶點(diǎn)的腫瘤，特異性強(qiáng)，能選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞。特異性強(qiáng)，能選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞。腫瘤靶向藥物腫瘤靶向藥物分類和特性分類和特性v單克隆抗體藥物單克隆抗體藥物 非結(jié)合型單抗非結(jié)合型單抗 結(jié)合型單抗結(jié)合型單抗v小分子化合物小分子化

4、合物 酪氨酸激酶抑制劑酪氨酸激酶抑制劑 血管生成抑制劑血管生成抑制劑 蛋白酶體抑制劑蛋白酶體抑制劑 環(huán)氧化酶抑制劑環(huán)氧化酶抑制劑 雌激素受體抑制劑雌激素受體抑制劑 其它小分子化合物其它小分子化合物 凋亡誘導(dǎo)劑凋亡誘導(dǎo)劑 周期蛋白酶抑制劑周期蛋白酶抑制劑 端粒酶抑制劑端粒酶抑制劑一、單克隆抗體藥物一、單克隆抗體藥物v某些表面抗原主要存在于惡性細(xì)胞而某些表面抗原主要存在于惡性細(xì)胞而不存在于周圍正常細(xì)胞上，這些腫瘤不存在于周圍正常細(xì)胞上，這些腫瘤相關(guān)抗原可成為特異性抗體結(jié)合的靶相關(guān)抗原可成為特異性抗體結(jié)合的靶點(diǎn)。能結(jié)合到腫瘤細(xì)胞上引發(fā)特異性點(diǎn)。能結(jié)合到腫瘤細(xì)胞上引發(fā)特異性免疫反應(yīng)而導(dǎo)致細(xì)胞死亡的單抗

5、，稱免疫反應(yīng)而導(dǎo)致細(xì)胞死亡的單抗，稱為抗腫瘤單抗藥物。為抗腫瘤單抗藥物。1.非結(jié)合型單抗非結(jié)合型單抗v這類藥物能直接結(jié)合到腫瘤細(xì)胞上，這類藥物能直接結(jié)合到腫瘤細(xì)胞上，觸發(fā)宿主免疫反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞死亡；觸發(fā)宿主免疫反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞死亡；或通過抗原抗體結(jié)合后，阻斷或中或通過抗原抗體結(jié)合后，阻斷或中和靶分子的生物學(xué)活性，干擾細(xì)胞和靶分子的生物學(xué)活性，干擾細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)而發(fā)揮抗腫瘤作用。間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)而發(fā)揮抗腫瘤作用。CD20-利妥昔單抗利妥昔單抗(rituxmab)v商品名商品名:美羅華美羅華v1997年真正意義上第一個(gè)腫瘤靶向藥物年真正意義上第一個(gè)腫瘤靶向藥物v抗抗CD20的人鼠嵌合抗體的人鼠嵌合抗體v主

6、要治療復(fù)發(fā)性或難治性低度惡性主要治療復(fù)發(fā)性或難治性低度惡性B細(xì)細(xì)胞淋巴瘤；現(xiàn)也用于中、高度惡性胞淋巴瘤；現(xiàn)也用于中、高度惡性B細(xì)細(xì)胞淋巴瘤。胞淋巴瘤。CD52-阿侖單抗阿侖單抗(alemtuzumab)v抗抗CD52的人源化單抗的人源化單抗v用于治療苯丙酸氮芥和氟達(dá)拉濱治療用于治療苯丙酸氮芥和氟達(dá)拉濱治療失敗的失敗的B淋巴細(xì)胞性白血病，某些淋巴細(xì)胞性白血病，某些T細(xì)細(xì)胞淋巴瘤如蕈樣霉菌病和胞淋巴瘤如蕈樣霉菌病和Sezary綜合綜合征。征。HER2-曲妥珠單抗曲妥珠單抗(trastuzumab)v商品名商品名:赫賽汀赫賽汀(herceptin)v抗抗EGFR 2(Her2)的人源化單抗的人源化單

7、抗v用于治療用于治療Her2高表達(dá)的乳腺癌和其它惡高表達(dá)的乳腺癌和其它惡性腫瘤性腫瘤(胃癌、卵巢癌等胃癌、卵巢癌等)。EGFR-西妥昔單抗西妥昔單抗(cetuximab)v抗抗EGFR(Her1)的人鼠嵌合抗體的人鼠嵌合抗體v用于治療標(biāo)準(zhǔn)化方案無效，且用于治療標(biāo)準(zhǔn)化方案無效，且EGFR陽陽性的轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌。性的轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌。v人源化的單克隆抗體帕尼單抗人源化的單克隆抗體帕尼單抗（Panitumumab）VEGF-貝伐單抗貝伐單抗(bevacizumab)v抗抗VEGF的重組人源化單抗的重組人源化單抗v抗腫瘤內(nèi)新生血管形成的作用抗腫瘤內(nèi)新生血管形成的作用v用于治療進(jìn)展期或轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌，用于

8、治療進(jìn)展期或轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌，與標(biāo)準(zhǔn)化方案聯(lián)合應(yīng)用，能顯著提與標(biāo)準(zhǔn)化方案聯(lián)合應(yīng)用，能顯著提高療效并延長(zhǎng)生存。高療效并延長(zhǎng)生存。2.結(jié)合型單抗結(jié)合型單抗v由能特異性識(shí)別腫瘤抗原的單抗由能特異性識(shí)別腫瘤抗原的單抗偶聯(lián)到放射性核素或細(xì)胞毒素上，偶聯(lián)到放射性核素或細(xì)胞毒素上，以提高對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷力。以提高對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷力。替伊莫單抗替伊莫單抗(britumomab)v第一個(gè)得到美國(guó)第一個(gè)得到美國(guó)FDA批準(zhǔn)的單抗批準(zhǔn)的單抗放射性放射性核素偶聯(lián)物核素偶聯(lián)物v商品名：商品名：Zevalinv由由90Y(釔釔)通過連接螯合劑通過連接螯合劑tiuxetan偶聯(lián)到鼠偶聯(lián)到鼠抗抗CD20抗體上的抗腫瘤單抗偶聯(lián)物。

9、抗體上的抗腫瘤單抗偶聯(lián)物。v用于利妥昔單抗治療無效或復(fù)發(fā)的低度惡用于利妥昔單抗治療無效或復(fù)發(fā)的低度惡性性B細(xì)胞淋巴瘤。細(xì)胞淋巴瘤。托西莫單抗托西莫單抗(tositumomab)v另一種單抗另一種單抗放射性核素偶聯(lián)物放射性核素偶聯(lián)物v由由131I(碘碘)偶聯(lián)偶聯(lián)(bexxan)到鼠抗到鼠抗CD20抗體抗體v用于標(biāo)準(zhǔn)化療方案治療無效的低度惡性用于標(biāo)準(zhǔn)化療方案治療無效的低度惡性B細(xì)胞淋巴瘤。細(xì)胞淋巴瘤。吉姆單抗吉姆單抗(gemtuzumab)v商品名商品名:Mylotargv第一個(gè)得到美國(guó)第一個(gè)得到美國(guó)FDA批準(zhǔn)的單抗批準(zhǔn)的單抗細(xì)胞毒素細(xì)胞毒素偶聯(lián)物偶聯(lián)物v由抗由抗CD33重組人源化單抗與細(xì)胞毒類抗

10、腫瘤重組人源化單抗與細(xì)胞毒類抗腫瘤抗生素刺孢霉素抗生素刺孢霉素(calicheamicin)偶聯(lián)而成。偶聯(lián)而成。v用于治療標(biāo)準(zhǔn)化方案初治失敗，用于治療標(biāo)準(zhǔn)化方案初治失敗，CD33陽性急陽性急性髓性白血病性髓性白血病(AML)的的60歲以上的中老年患?xì)q以上的中老年患者，現(xiàn)也可與標(biāo)準(zhǔn)化療方案聯(lián)合治療者，現(xiàn)也可與標(biāo)準(zhǔn)化療方案聯(lián)合治療AML。二、小分子化合物二、小分子化合物v某些非細(xì)胞毒性小分子化合物具有明確某些非細(xì)胞毒性小分子化合物具有明確的作用靶點(diǎn)，通過阻斷治療中異?；罨淖饔冒悬c(diǎn)，通過阻斷治療中異?；罨牡募っ?、生長(zhǎng)因子和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激酶、生長(zhǎng)因子和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等途等途徑來抑制腫瘤的生長(zhǎng)，從而達(dá)

11、到治療的徑來抑制腫瘤的生長(zhǎng)，從而達(dá)到治療的目的。這些小分子化合物稱為小分子腫目的。這些小分子化合物稱為小分子腫瘤靶向治療藥物。瘤靶向治療藥物。1.酪氨酸激酶抑制劑（酪氨酸激酶抑制劑（TKI）吉非替尼吉非替尼(gefitinib)v商品名：易瑞沙商品名：易瑞沙(iressa)v是一種針對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體是一種針對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)酪氨酸激酶的口服小分子抑制劑酪氨酸激酶的口服小分子抑制劑v用于治療不能手術(shù)或復(fù)發(fā)的用于治療不能手術(shù)或復(fù)發(fā)的NSCLC。埃羅替尼埃羅替尼(erlotinib)v一種新的、選擇性一種新的、選擇性EGFR受體酪氨酸激受體酪氨酸激酶抑制劑酶抑制劑v可用于治療對(duì)化療耐藥

12、的可用于治療對(duì)化療耐藥的NSCLC、卵巢、卵巢癌和頭頸部癌等。癌和頭頸部癌等。v拉帕替尼（拉帕替尼（Lapatinib）是一種能同時(shí)抑）是一種能同時(shí)抑制制EGFR和和HER-2，用于，用于Herceptin耐藥耐藥的乳腺癌。的乳腺癌。KIT陽性和可能陽性腫瘤陽性和可能陽性腫瘤vGISTv精原細(xì)胞瘤精原細(xì)胞瘤v肥大細(xì)胞瘤肥大細(xì)胞瘤v黑色素瘤黑色素瘤/透明細(xì)胞肉瘤透明細(xì)胞肉瘤vES/PNETvKaposi肉瘤肉瘤/血管肉瘤血管肉瘤v孤立性纖維瘤孤立性纖維瘤v隆突性皮膚纖維肉瘤隆突性皮膚纖維肉瘤v肌纖維母細(xì)胞瘤肌纖維母細(xì)胞瘤/纖維瘤病纖維瘤病v分化良好脂肪肉瘤分化良好脂肪肉瘤v轉(zhuǎn)移性小細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移性小

13、細(xì)胞癌甲磺酸伊馬替尼甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)v商品名商品名:格列衛(wèi)格列衛(wèi)(gleevec)v能抑制能抑制BCR-ABL酪氨酸激酶及其下游信號(hào)酪氨酸激酶及其下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，2001年年FDA批準(zhǔn)用于治療慢粒批準(zhǔn)用于治療慢粒（CML）；）；v能抑制能抑制C-Kit和和PEGFR酪氨酸激酶活性，酪氨酸激酶活性，2002年被批準(zhǔn)用于治療年被批準(zhǔn)用于治療C-kit(CD117)或或PDGFRa陽性的、不能手術(shù)或轉(zhuǎn)移性胃腸陽性的、不能手術(shù)或轉(zhuǎn)移性胃腸間質(zhì)瘤（間質(zhì)瘤（GIST）。）。VEGFR酪氨酸激酶抑制劑酪氨酸激酶抑制劑VEGFR酪氨酸激酶抑制劑酪氨酸激酶抑制劑v

14、SU668、SU11248、ZD6474、PTK787/ZK222584等小分子等小分子化合物化合物v口服或腹腔注射口服或腹腔注射v抑制抑制VEGFR酪氨酸激酶的活酪氨酸激酶的活性，從而抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞性，從而抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)。生長(zhǎng)。其它信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑其它信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑v法尼基轉(zhuǎn)移酶法尼基轉(zhuǎn)移酶(farnesyltransferase)，是是RAS蛋白活化必不可少的關(guān)鍵酶，蛋白活化必不可少的關(guān)鍵酶，抑制法尼基轉(zhuǎn)移酶活性，可阻斷抑制法尼基轉(zhuǎn)移酶活性，可阻斷RAS蛋白在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。臨床試驗(yàn)階蛋白在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。臨床試驗(yàn)階段。段。多靶點(diǎn)酶抑制劑多靶點(diǎn)酶抑制劑v索拉菲尼索拉菲尼(so

15、rafenib，商品名，商品名Nexavar)：vFDA 10年來第一次批準(zhǔn)治療腎癌的藥物，年來第一次批準(zhǔn)治療腎癌的藥物，還可用于還可用于HCC,Melanoma,NSCLC。v范得他尼范得他尼(vandetanib，ZD6474，商品名，商品名Zactima):口服，口服，NSCLCvSunitinib：口服，治療：口服，治療GIST和晚期腎癌和晚期腎癌2.血管生成抑制劑血管生成抑制劑v主要針對(duì)腫瘤血管形成的某主要針對(duì)腫瘤血管形成的某些因子及關(guān)鍵步驟進(jìn)行干預(yù)。些因子及關(guān)鍵步驟進(jìn)行干預(yù)。血管抑素血管抑素(angiostatin)內(nèi)皮抑素內(nèi)皮抑素(endostatin)v抑制由堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)

16、因子抑制由堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)誘發(fā)的血管生長(zhǎng)，特異性抑誘發(fā)的血管生長(zhǎng)，特異性抑制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，但不制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，但不直接影響腫瘤細(xì)胞的增生。直接影響腫瘤細(xì)胞的增生。vYH16（Endostar，恩度，恩度)為我國(guó)為我國(guó)生產(chǎn)的重組人血管內(nèi)皮抑制素注射生產(chǎn)的重組人血管內(nèi)皮抑制素注射液，用于不能手術(shù)的液，用于不能手術(shù)的NSCLC。VEGFR酪氨酸激酶抑制劑酪氨酸激酶抑制劑v抑制抑制VEGFR酪酪氨酸激酶的活氨酸激酶的活性，從而抑制性，從而抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)。生長(zhǎng)。O-(氯乙酰氯乙酰-氨甲?；奔柞；?煙曲霉醇煙曲霉醇(TNP-470)v一種煙曲霉菌分

17、泌的煙曲霉素的人一種煙曲霉菌分泌的煙曲霉素的人工合成類似物，對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增工合成類似物，對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的抑制作用強(qiáng)，無明顯毒副作用。殖的抑制作用強(qiáng)，無明顯毒副作用。金屬蛋白酶抑制劑金屬蛋白酶抑制劑v能與基質(zhì)金屬蛋白酶（能與基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）活性部位的鋅結(jié)合，抑制血管生活性部位的鋅結(jié)合，抑制血管生成。成。沙利度胺沙利度胺(thalisdomide)v反應(yīng)停反應(yīng)停v抑制抑制bFGF 和和VEGF介導(dǎo)的血管生介導(dǎo)的血管生成；也可抑制成；也可抑制TNF-a合成，阻斷合成，阻斷NF-kB激活，下調(diào)細(xì)胞表面粘附分激活，下調(diào)細(xì)胞表面粘附分子和減少自由基生成。子和減少自由基生成。3.蛋白酶體抑制

18、劑蛋白酶體抑制劑v多酶復(fù)合體多酶復(fù)合體蛋白酶體蛋白酶體(proteasome)在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期上起作用，促進(jìn)細(xì)胞增在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期上起作用，促進(jìn)細(xì)胞增殖。殖。v硼替佐米硼替佐米(bortezomib)，2003年年FDA批批準(zhǔn)用于治療復(fù)發(fā)性和難治性多發(fā)性骨髓準(zhǔn)用于治療復(fù)發(fā)性和難治性多發(fā)性骨髓瘤。瘤。4.環(huán)氧化酶抑制劑環(huán)氧化酶抑制劑v環(huán)氧化酶環(huán)氧化酶(cyclooxygenase,COX)是前列腺素是前列腺素合成過程中的催化酶，包括合成過程中的催化酶，包括COX1和和COX2。v結(jié)腸腺瘤和結(jié)腸癌高表達(dá)結(jié)腸腺瘤和結(jié)腸癌高表達(dá)COX2，肺癌、乳，肺癌、乳腺癌、前列腺癌及腦腫瘤也常過表達(dá)腺癌、前列腺癌及腦

19、腫瘤也常過表達(dá)COX2。v選擇性選擇性COX2抑制劑抑制劑西樂葆西樂葆(celeoxib)用于治用于治療家族性多發(fā)性腺瘤性息肉療家族性多發(fā)性腺瘤性息肉(FAP)，可降低結(jié)，可降低結(jié)腸癌的發(fā)生。腸癌的發(fā)生。5.雌激素受體抑制劑雌激素受體抑制劑v他莫西芬他莫西芬(tamoxifen)，能與雌二醇競(jìng)爭(zhēng)雌激素，能與雌二醇競(jìng)爭(zhēng)雌激素受體，與胞質(zhì)雌激素受體結(jié)合形成復(fù)合物，進(jìn)受體，與胞質(zhì)雌激素受體結(jié)合形成復(fù)合物，進(jìn)入細(xì)胞后不能刺激入細(xì)胞后不能刺激RNA和蛋白質(zhì)合成，從而抑和蛋白質(zhì)合成，從而抑制依賴雌激素才能生長(zhǎng)的腫瘤。制依賴雌激素才能生長(zhǎng)的腫瘤。v用于治療絕經(jīng)后乳腺癌患者的姑息治療和手術(shù)用于治療絕經(jīng)后乳腺癌

20、患者的姑息治療和手術(shù)后的輔助治療，也可治療子宮內(nèi)膜樣腺癌。后的輔助治療，也可治療子宮內(nèi)膜樣腺癌。v阿那曲唑阿那曲唑(anastrozole)，來曲唑，來曲唑(letrozole)和依和依西美坦西美坦(exemestane)等芳香化酶抑制劑，能與等芳香化酶抑制劑，能與內(nèi)源性底物競(jìng)爭(zhēng)芳香化酶的活性部位，抑制酶內(nèi)源性底物競(jìng)爭(zhēng)芳香化酶的活性部位，抑制酶的活性，明顯降低雌激素水平，可用于治療絕的活性，明顯降低雌激素水平，可用于治療絕經(jīng)婦女的晚期乳腺癌。經(jīng)婦女的晚期乳腺癌。6.其它小分子化合物其它小分子化合物(正在臨床試驗(yàn)階段正在臨床試驗(yàn)階段)v凋亡誘導(dǎo)劑凋亡誘導(dǎo)劑v周期蛋白酶抑制劑周期蛋白酶抑制劑v端粒

21、酶抑制劑端粒酶抑制劑v反義核苷酸反義核苷酸THANK YOUSUCCESS2022/11/2741可編輯腫瘤靶向治療中腫瘤靶向治療中分子靶點(diǎn)的檢測(cè)及結(jié)果判讀分子靶點(diǎn)的檢測(cè)及結(jié)果判讀分子靶點(diǎn)檢測(cè)的常用技術(shù)分子靶點(diǎn)檢測(cè)的常用技術(shù)v免疫組織化學(xué)免疫組織化學(xué)(IHC)v實(shí)時(shí)熒光定量實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)v熒光原位雜交熒光原位雜交(FISH)v顯色原位雜交顯色原位雜交(CISH)vDNA測(cè)序測(cè)序(DNA Sequence)1.免疫組織化學(xué)技術(shù)免疫組織化學(xué)技術(shù)(IHC)v檢測(cè)腫瘤分子靶點(diǎn)的蛋白產(chǎn)物表達(dá)情況。檢測(cè)腫瘤分子靶點(diǎn)的蛋白產(chǎn)物表達(dá)情況。v最常用和最簡(jiǎn)便。最常用和最簡(jiǎn)便。CD20v正常正

22、常B淋巴細(xì)胞從淋巴細(xì)胞從前體前體B細(xì)胞到前漿細(xì)胞到前漿細(xì)胞，絕大多數(shù)細(xì)胞，絕大多數(shù)B細(xì)胞淋巴瘤均表細(xì)胞淋巴瘤均表達(dá)；達(dá)；v陽性反應(yīng)定位于陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞膜上。細(xì)胞膜上。C-KIT蛋白蛋白(CD117)v非受體酪氨酸激酶非受體酪氨酸激酶v絕大多數(shù)絕大多數(shù)GIST存在存在C-KIT基因功能獲得性基因功能獲得性突變，導(dǎo)致該基因不突變，導(dǎo)致該基因不需與配體結(jié)合，即可需與配體結(jié)合，即可發(fā)生自磷酸化而激活發(fā)生自磷酸化而激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路vCD117的陽性反應(yīng)定的陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞膜或和胞漿。位于細(xì)胞膜或和胞漿。HER2蛋白蛋白v具有受體酪氨酸激酶活性的表皮生長(zhǎng)因具有受體酪氨酸激酶活性的表皮生長(zhǎng)

23、因子受體蛋白，在控制上皮細(xì)胞生長(zhǎng)、分子受體蛋白，在控制上皮細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、粘附和活動(dòng)等細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的化、粘附和活動(dòng)等細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化上起重要作用?；罨掀鹬匾饔?。v曲妥珠單抗能下調(diào)過度表達(dá)曲妥珠單抗能下調(diào)過度表達(dá)HER2蛋白蛋白的乳癌癌細(xì)胞表面的乳癌癌細(xì)胞表面HER2受體的數(shù)目。受體的數(shù)目。v1998年年FDA批準(zhǔn)了單抗治療前的標(biāo)準(zhǔn)檢批準(zhǔn)了單抗治療前的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)程序測(cè)程序v檢測(cè)對(duì)象為浸潤(rùn)性乳腺癌檢測(cè)對(duì)象為浸潤(rùn)性乳腺癌v陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞膜陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞膜ST.GALLEN 2007HER2：乳腺癌危險(xiǎn)因素的新定義：乳腺癌危險(xiǎn)因素的新定義RISK G1 T2ER/PR+淋巴結(jié)淋巴結(jié)

24、-HER2-LVI無無淋巴結(jié)淋巴結(jié)1-3 和和HER2+,ER/PR-或或淋巴結(jié)淋巴結(jié)4年齡年齡2淋巴結(jié)淋巴結(jié)-,HER2+,ER/PR-或或LVI 侵潤(rùn)淋巴結(jié)侵潤(rùn)淋巴結(jié)1-3且且HER2-,ER/PR+低低中中高高RISK2007 ASCO/CAP GuidelinesvScore 0 No staining is observed or cell membrane staining is observed in less than10%of the tumor cells.vScore 1+A faint perceptible membrane staining can be detec

25、ted in more than 10%of the tumor cells.The cells are only stained in part of their membrane.vScore 2+A weak to moderate complete membrane staining is observed in more than 10%of the tumor cells.vScore 3+A strong complete membrane staining is observed in more than 30%of the tumor cells.JCO,25(1):2007

26、2009版中國(guó)乳腺癌版中國(guó)乳腺癌HER2指南指南v0：無著色，或：無著色，或10%的浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)弱或中度強(qiáng)度，的浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)弱或中度強(qiáng)度，且不完整的膜著色；且不完整的膜著色；v2+：10%浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)弱或中度強(qiáng)度，浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)弱或中度強(qiáng)度，且完整的膜著色；或且完整的膜著色；或30%癌細(xì)胞胞膜強(qiáng)染色，連續(xù)，環(huán)繞癌細(xì)胞胞膜強(qiáng)染色，連續(xù)，環(huán)繞整個(gè)胞膜。整個(gè)胞膜。v0,1+Negativev2+equivocalv3+Positive(曲妥珠治療指征曲妥珠治療指征)EGFR/HER1蛋白蛋白v位于位于7p的的EGFR基因的蛋白產(chǎn)物，廣泛分布基因的蛋白產(chǎn)物，廣泛分布于哺乳動(dòng)物的上皮細(xì)胞中于哺乳動(dòng)

27、物的上皮細(xì)胞中v西妥昔單抗直接作用于西妥昔單抗直接作用于EGFR的細(xì)胞外配體的細(xì)胞外配體結(jié)合區(qū)，阻斷結(jié)合區(qū)，阻斷EGF和和TGF等配體與等配體與EGFR結(jié)結(jié)合，從而抑制細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶的活性，導(dǎo)合，從而抑制細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶的活性，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和凋亡致腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和凋亡v2004年年FDA批準(zhǔn)西妥昔單抗用于治療批準(zhǔn)西妥昔單抗用于治療EGFR陽性的轉(zhuǎn)移性大腸癌陽性的轉(zhuǎn)移性大腸癌EGFR/HER1蛋白蛋白v陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞膜。陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞膜。v反應(yīng)強(qiáng)度分為反應(yīng)強(qiáng)度分為1+、2+、3+。v1%癌細(xì)胞的胞膜染色癌細(xì)胞的胞膜染色超過背景細(xì)胞即為陽性，超過背景細(xì)胞即為陽性，無論染色是否完

28、整環(huán)繞無論染色是否完整環(huán)繞胞膜。胞膜。ER、PR蛋白蛋白v陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞核。陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞核。v染色強(qiáng)度及百分比。染色強(qiáng)度及百分比。v2010 ASCO/CAP guideline 1%Positive,10%確切的用藥標(biāo)準(zhǔn)，確切的用藥標(biāo)準(zhǔn)，1-10%，需綜合考慮，需綜合考慮2.實(shí)時(shí)熒光定量實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)v檢測(cè)腫瘤分子靶點(diǎn)的檢測(cè)腫瘤分子靶點(diǎn)的mRNA表達(dá)情況。表達(dá)情況。v操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，快速，高通量。操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，快速，高通量。v儀器昂貴，最好需要標(biāo)準(zhǔn)儀器昂貴，最好需要標(biāo)準(zhǔn)PCR室。室。v有替代測(cè)序應(yīng)用于基因突變檢測(cè)，如有替代測(cè)序應(yīng)用于基因突變檢測(cè)，如E

29、GFR,K-ras檢測(cè)。檢測(cè)。2-ct3.熒光原位雜交技術(shù)熒光原位雜交技術(shù)(FISH)v是一種分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，通過熒光標(biāo)記的是一種分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，通過熒光標(biāo)記的DNA探針與細(xì)胞核內(nèi)的探針與細(xì)胞核內(nèi)的DNA靶序列雜交。在熒靶序列雜交。在熒光顯微鏡下，于細(xì)胞和光顯微鏡下，于細(xì)胞和(或或)組織原位觀察并分組織原位觀察并分析細(xì)胞核內(nèi)雜交于析細(xì)胞核內(nèi)雜交于DNA靶序列的多種彩色探針靶序列的多種彩色探針信號(hào)，以獲得細(xì)胞內(nèi)多條染色體信號(hào)，以獲得細(xì)胞內(nèi)多條染色體(或染色體片段或染色體片段)或多種基因狀態(tài)的信息?；蚨喾N基因狀態(tài)的信息。vFISH檢測(cè)基因擴(kuò)增，準(zhǔn)確性比其它檢測(cè)技術(shù)高，檢測(cè)基因擴(kuò)增，準(zhǔn)確性比

30、其它檢測(cè)技術(shù)高，可避免由于染色體的多體而呈現(xiàn)的假陽性，金可避免由于染色體的多體而呈現(xiàn)的假陽性，金標(biāo)準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)。v缺點(diǎn)：技術(shù)操作復(fù)雜，試劑及設(shè)備昂貴。缺點(diǎn)：技術(shù)操作復(fù)雜，試劑及設(shè)備昂貴。樣本預(yù)處理樣本預(yù)處理探針、樣本變性探針、樣本變性探針樣本雜交探針樣本雜交雜交后洗滌雜交后洗滌結(jié)果觀察結(jié)果觀察原理及實(shí)驗(yàn)操作原理及實(shí)驗(yàn)操作HER2基因：基因：FISHvHER2試劑盒為雙色熒光標(biāo)記探針：試劑盒為雙色熒光標(biāo)記探針：HER-2基基因，為橘紅色熒光，該基因所在的因，為橘紅色熒光，該基因所在的17號(hào)染色號(hào)染色體著絲點(diǎn)為綠色熒光作為內(nèi)對(duì)照，用于判斷體著絲點(diǎn)為綠色熒光作為內(nèi)對(duì)照，用于判斷HER-2基因的拷貝數(shù)增多

31、是真正擴(kuò)增，還是基因的拷貝數(shù)增多是真正擴(kuò)增，還是由于由于17號(hào)染色體的多體而導(dǎo)致號(hào)染色體的多體而導(dǎo)致HER2基因拷貝基因拷貝數(shù)相對(duì)增多。數(shù)相對(duì)增多。vO/G2.2，PostivevO/G2.0 or O6 PostiveO/G90%Concordance between FISH and IHC HER-2 status determination using the 30%criterionFISH-positiveF ISH-negativeTotalIHC-positive(3+)1699178IHC-negative(0,1+,2+)12104116Total181113294Conc

32、ordanceEstimate95%CI coefficient0.8500.787 to 0.913Sensitivity93.4%89.9%to 96.9%Specificity92.0%87.1%to 96.9%Overall*92.9%90.0%to 95.8%IHC,CISH,FISH符合率符合率IHCCISH（）（）FISH（）（）Group I0/1+,n=69無無擴(kuò)擴(kuò)增，增，67/69（97）無無擴(kuò)擴(kuò)增，增，69/69（100）Group II3+,n=50擴(kuò)擴(kuò)增，增，47/50（94）擴(kuò)擴(kuò)增，增，46/50（92）Group III2+，n=135 無無擴(kuò)擴(kuò)增，增，89/13

33、5；（；（66）擴(kuò)擴(kuò)增，增，37/135；（；（27）5.DNA測(cè)序技術(shù)測(cè)序技術(shù)v將組織中將組織中DNA提取后行提取后行PCR擴(kuò)增，然后用擴(kuò)增，然后用測(cè)序分析儀分析有無基因突變、突變位點(diǎn)測(cè)序分析儀分析有無基因突變、突變位點(diǎn)和突變形式的方法。和突變形式的方法。v目前主要用于目前主要用于C-KIT、PDGFR、K-ras、EGFR、BRAF等突變，為臨床靶向藥物治等突變，為臨床靶向藥物治療和療效判斷提供客觀依據(jù)。療和療效判斷提供客觀依據(jù)。基因序列分析基因序列分析PDGFRA-18 雜合性點(diǎn)突變：雜合性點(diǎn)突變：AA:842位，位，GACGTC，雜合子，天門冬氨酸雜合子，天門冬氨酸(Asp,D)纈氨酸纈氨酸(Val,V)。C-KIT基因基因v大多數(shù)大多數(shù)GIST存在存在C-KIT基因突變，突基因突變，突變率變率72.6%；突變用藥才有效。突變用藥才有效。v其中：第其中：第11號(hào)外顯子占號(hào)外顯子占6