《基礎(chǔ)生物化學(xué)ppt (12).pdf》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《基礎(chǔ)生物化學(xué)ppt (12).pdf（12頁珍藏版）》請(qǐng)?jiān)趨R文網(wǎng)上搜索。

1、12.5 核酸的理化性質(zhì)核酸的理化性質(zhì)一、核酸的一般性質(zhì)一、核酸的一般性質(zhì)2 屬兩性電解質(zhì)，呈酸性，可利用電泳分離屬兩性電解質(zhì)，呈酸性，可利用電泳分離DNA 的的pI 44.5RNA 的的pI 22.5 DNA以雙螺旋結(jié)構(gòu)存在，以雙螺旋結(jié)構(gòu)存在，RNA為局部雙螺旋為局部雙螺旋 微溶于水，其鈉鹽在水中的溶解度最高微溶于水，其鈉鹽在水中的溶解度最高 不溶于有機(jī)溶劑。乙醇沉淀核酸不溶于有機(jī)溶劑。乙醇沉淀核酸 溶液黏度高溶液黏度高 DNA RNA 相對(duì)分子量大相對(duì)分子量大RNA 幾萬幾萬 幾百萬幾百萬 DNA 1.6106 2.2109 二、核酸的紫外吸收特性二、核酸的紫外吸收特性3蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) ma

2、x=280 核酸核酸 max=260測(cè)定核酸的含量測(cè)定核酸的含量41.DNA或或RNA的定量的定量 OD260=1.0 相當(dāng)于相當(dāng)于50 g/ml dsDNA 40 g/ml ssDNA（或（或RNA）20 g/ml 寡核苷酸寡核苷酸2.判斷核酸樣品的純度判斷核酸樣品的純度 純純 dsDNA A 260/A280=1.8 純純 RNA A 260/A280=2.0 若溶液中含有雜蛋白或苯酚，則若溶液中含有雜蛋白或苯酚，則A260/A280比值降低比值降低OD260的應(yīng)用的應(yīng)用純的核酸樣品可根據(jù)純的核酸樣品可根據(jù)260nm的光吸收值算出其含量的光吸收值算出其含量5 根據(jù)增色減色效應(yīng)根據(jù)增色減色效

3、應(yīng) 判斷判斷DNA變性程度變性程度增色增色效應(yīng)效應(yīng)核苷酸核苷酸ssDNARNA或或減色減色效應(yīng)效應(yīng)dsDNA二、核酸的紫外吸收特性二、核酸的紫外吸收特性增色效應(yīng)：增色效應(yīng)：DNA變性時(shí)其溶液變性時(shí)其溶液OD260增高的現(xiàn)象。增高的現(xiàn)象。DNA的紫外吸收光譜的紫外吸收光譜三、三、核酸的變性和復(fù)性核酸的變性和復(fù)性6（一）（一）變性變性在某些理化因素作用下，核酸雙螺旋區(qū)的在某些理化因素作用下，核酸雙螺旋區(qū)的氫鍵氫鍵斷裂斷裂變成單鏈，變成單鏈，不涉及共價(jià)鍵斷裂。不涉及共價(jià)鍵斷裂。1.概念概念7熱變性熱變性 酸堿變性（酸堿變性（pH小于小于4或大于或大于11）變性劑（尿素、鹽酸胍、甲醛）變性劑（尿素、鹽

4、酸胍、甲醛）變性因素變性因素：理化性質(zhì)：理化性質(zhì)：260nm吸收值吸收值增色效應(yīng)；增色效應(yīng)；粘度粘度，沉降速度，沉降速度生物活性：二級(jí)結(jié)構(gòu)改變，部分生物活性：二級(jí)結(jié)構(gòu)改變，部分失活失活 變性后的理化性質(zhì)變性后的理化性質(zhì)：增色效應(yīng)：增色效應(yīng)：DNA變性時(shí)其溶液變性時(shí)其溶液OD260增高的現(xiàn)象。增高的現(xiàn)象。8 DNA變性是變性是爆發(fā)式爆發(fā)式的，變性作的，變性作用發(fā)生在一個(gè)用發(fā)生在一個(gè)很窄的溫度很窄的溫度范圍內(nèi)。范圍內(nèi)。（1）熔解溫度熔解溫度 (Tm,melting temperature)熱變性過程中光吸收熱變性過程中光吸收達(dá)到最大吸收一半時(shí)達(dá)到最大吸收一半時(shí)的溫度（解鏈溫度）的溫度（解鏈溫度）D

5、NA的的Tm值一般值一般在在70 90之間之間2.熱變性和熱變性和Tm（2）影響DNA的Tm值的因素9 DNA均一性均一性 均一性高，變性的溫均一性高，變性的溫度范圍越窄，因此可度范圍越窄，因此可根據(jù)根據(jù)Tm值分析值分析DNA的均一性的均一性 G-C含量含量與與Tm值成正比值成正比（G+C）含量高的）含量高的DNA，其變性，其變性Tm也高也高（2）影響DNA的Tm值的因素10DNA制劑不應(yīng)保存在離子強(qiáng)度過低的溶液中制劑不應(yīng)保存在離子強(qiáng)度過低的溶液中 表示某一表示某一來源來源DNA的的Tm值時(shí)，值時(shí)，必須指出必須指出其測(cè)定條件其測(cè)定條件 DNA所處溶液的所處溶液的離子強(qiáng)度離子強(qiáng)度 離子強(qiáng)度高，離

6、子強(qiáng)度高，Tm高高11（二）（二）復(fù)性（復(fù)性（renaturation）高于高于Tm值值5 復(fù)性復(fù)性 也稱退火也稱退火 緩緩慢慢冷冷卻卻迅迅速速冷冷卻卻復(fù)性：變性復(fù)性：變性DNA分開的兩條鏈在適當(dāng)（一般低于分開的兩條鏈在適當(dāng)（一般低于Tm 2025）條件下又重新締條件下又重新締合而而恢復(fù)成雙螺旋結(jié)構(gòu)恢復(fù)成雙螺旋結(jié)構(gòu)的過程。的過程。減色效應(yīng)：減色效應(yīng)：DNA復(fù)性時(shí)，其溶液復(fù)性時(shí)，其溶液OD260降低。降低。12 熱變性熱變性DNA在緩在緩 慢冷卻時(shí)可以復(fù)慢冷卻時(shí)可以復(fù) 性，快速冷卻不性，快速冷卻不 能復(fù)性能復(fù)性 DNA濃度越大，濃度越大，復(fù)性越快復(fù)性越快 DNA片段越大，片段越大，復(fù)性越慢復(fù)性越慢（二）（二）復(fù)性（復(fù)性（renaturation）